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实验步骤
水合氯醛麻醉大鼠，取腹部中线打开腹腔，腹主动脉放血，取出肾脏。
放入有D-Hanks液的小烧杯里，并用D-Hanks液冲洗，去除血细胞，之后放入平面皿里，去除肾盂和肾包膜，剪开肾脏，用小刀片刮出肾皮质。
把肾皮质转移到干净小烧杯里，用眼科剪剪碎，以1mm3大小为度。
加入少量的D-Hanks液，放到重叠的2层不锈钢筛网上，用注射器针头轻碾组织，同时用D-Hanks液冲洗，一直碾到组织发白即可。
用D-Hanks液冲洗200目上的筛网组织，使其转移至干净的平面皿里，再用移液管转移到10ml离心管里。
低速离心组织五分钟、1000r/min。用移液管（吸管或枪）去除上清液，加入0.1%Ⅳ胶原酶3ml,消化时间大概20-30min，边消化边观察（吸取少量的细胞悬液放在细胞计数板上用显微镜下观察，显示肾小球轻度破碎及松动即可），以肾小球散出但又不破碎为宜。
用20%FCS的DMEM终止消化，可用移液管（吸管或枪）吹打，再迅速离心五分钟，1000r/min。再滴加少许DMEM重悬。
重悬细胞液，用20ul枪头滴加到25ml的培养瓶瓶底（大约1-2滴）。然后向不同方向轻轻晃动培养瓶使肾小球悬液均匀种植在瓶底,然后迅速翻转培养瓶使培养面朝上，并轻轻晃动使细胞悬液分布均匀。
用注射器加入5mlDMEM至培养瓶中，放入培养箱中静置。
过3.5h后轻轻倒转培养瓶，使培养面朝下。四天内勿动培养瓶，第五天换液。可采用半量换液法，即用移液管弃去一半的旧培养液，加入适量新的培养液，目的是给细胞适应环境，在前一两次可采用这种方法。约2周上皮细胞接近长满瓶底,加入嘌呤霉素核苷( 5 mg/L )作用12 h选择性抑制上皮细胞生长。直至约4周时GMC布满培养瓶再进行转种。
