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标题:[求助]谁能帮我看看这是不是肺泡II型上皮细胞

bamboo16[使用道具]
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发表于 2011-12-29 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]谁能帮我看看这是不是肺泡II型上皮细胞

[求助]谁能帮我看看这是不是肺泡II型上皮细胞


我刚开始养的大鼠肺泡II型上皮细胞，基本上是按照Dobbs的方法培养的。
这是培养60小时以后拍的照片，不知道是不是我要的细胞，觉得非常不像，希望有高人指点一下。
另外，除了红细胞较多，巨噬细胞更是遍地都是，不知各位有没有更好的除去巨噬细胞的方法呀？我觉得养这个细胞真是麻烦呀～
谢谢！


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bamboo16[使用道具]
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发表于 2011-12-29 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再贴一张，感觉放大了就更不象了。


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发表于 2011-12-29 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，不好说是不是，不过你可以用II型上皮细胞的鉴定鉴定方法鉴定一下阿，我也正在养，方法基本也是Dobbs的，不过还没有经过存化的步骤，所以杂细胞很多，上一批都被我弃掉了，而且没有留下照片，等我做下一批的时候，我们可以交流一下经验，呵呵。对了，请教您以下，你用了DNAse么，用和不用效果怎么样？这个用到这里我不明白到底起什么作用
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2011-12-29 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我下次准备买BCIP/NBT染色试剂盒鉴定。
我一开始做就用了DNAse I，根据文献，采用消化液加这个是防止细胞聚集的，不过有没有效果我就不知道了，跟着做，呵呵~
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发表于 2011-12-29 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵，我已经买了BCIP/NBT染色试剂盒不过一直没有用，因为一直没有专业人员告诉我这个试剂盒能否反复冻融，它是需要在－20度保存的，所以不敢轻易用，不过很快我就打算用了，如果反复冻融不行就要考虑分装了，你的DNAse I也是按照250ug/ml配置的么，我的试剂是15000u,有的说它换算后应该是10mg,这样的话，算来我每瓶试剂也就能做不几次，好贵阿。
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发表于 2011-12-29 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看文献说灌洗就可以很好的除去巨噬细胞，不过效果好像不是很好，唉，这个细胞真是很令人头痛阿，我配的试剂一，有很多沉淀，你的也有么？别着急，我们一起慢慢摸索，等过两天我的细胞出来，我把照片弄上来，咱俩对照一下吧
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发表于 2011-12-29 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
关于染液我问问别人，有答案了再告诉你。
我的DNAse I买的是粉，所以没有换算的问题。25MG大概170左右吧！
你是指溶液II有沉淀么？这个我和在这个版上认识的一个战友讨论过这个问题，解决方案是：先单独溶解CaSO4，然后再加入溶解了其他物质的溶液中即可。
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发表于 2011-12-29 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我看您在写的溶液配方怎么和我的不一样阿，我的溶液一和您的一样，不过溶液二是在溶液一的基础上加的cacl2和
Mgso4就可以了，而且这里面没有CaSO4，您告诉我的先溶解的应该是MgSO4吧。不过我的好像确实是溶液一有沉淀，而二没有。
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小野花[使用道具]
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发表于 2011-12-29 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对了，还有一点就是这两种溶液因为有EGTA和Hepes缘故，我一直是过滤达到无菌的，是不是这两种溶液不可以高压消毒啊？
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2011-12-29 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的配方是参考的Dobbs的文献。溶液I没有一点沉淀，溶液II是多加这两个物质，Mg离子和SO4离子会形成MgSO4沉淀的呀，我是根据化学原理分析这种沉淀的可能性。所以我做了些改动和配置顺序变化，现在都没有沉淀。
我觉得这些都是缓冲溶液，一些小小的变动没有什么关系的，只要渗透压一样就可以了作用都是一样的。
我都是自己用0.22UM滤膜抽滤除菌的，不知道可不可以高压，不好意思。
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