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标题:[讨论帖]再谈细胞培养基ph值的调节

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[讨论帖]再谈细胞培养基ph值的调节

[讨论帖]再谈细胞培养基ph值的调节



看过群内很多关于培养基ph值的调节问题,有一个比较统一的说法是:
PH值的调整可以通过hepes液和NaHCO3来调整,不能用HCl。

那么,真的不能用HCl来调节吗?

我觉得是完全可以的,理由是:
我购买gibco公司的dmem-f12培养基的使用说明书明确的写到:use of 1N NaOH or 1N HCl is recommended.

D-MEM/F-12, Gibco, 12400-024说明书(我做了简单的翻译,仅供参考):

1)  measure out 5% less distilled water than desired total volume of medium, using a mixing container that is as close to the final volume as possible.

量出少于总量5%的蒸馏水
2)  add powered medium to 15 to 30℃ (room temperature) water with gentle stirring. (Do not heart water).
加入干粉培养基,轻轻搅拌(不能加热)
3)  rinse out inside of package to remove all traces of power.
冲洗包装袋 内壁
4)  add 1.2 g of NaHCO3 per liter of medium.
加入1.2g碳酸氢钠(每升)
5)  dilute to a desired volume with water. Stir until dissolved. (do not over-mix)
稀释至所需水量(轻轻搅拌,不要加过量了)
6)  adjust pH of medium to 0.2-0.3 below desired final working*:use of 1N NaOH or 1N HCl is recommended.(add slowly with stirring). After pH has been adjuster, keep container closed until medium is filtered.
调节ph值(比最后要求的ph低0.2-0.3,因为过滤以后会上升0.1-0.3*pH units will usually rise 0.1-0.3 upon filtration),用1N氢氧化钠或者1N盐酸调节,)调好后封装避免灰尘。
8)  sterilize immediately by membrane filtration. (positive pressure recommended).
立即用滤膜正压过滤
*pH units will usually rise 0.1-0.3 upon filtration

所以我觉得是可以的。

欢迎大家讨论,请给出操作的依据,谢谢!

附:

1N NaOH的配制方法(100ml)

4gNaOH溶于蒸馏水中,加水稀释至100ml

1N HCL的配制方法(100ml)

8.333ml浓盐酸,加水稀释至100ml

ps:NaOH要用烧杯称量,产热很厉害。要用容量瓶定容,容量瓶不能刷,不能烤干,得用无水乙醇润洗后挥发干燥,或者用吹风机冷风吹干。
(依据:化学课本和实验技术指导和化学老师)
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831226[使用道具]
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第一阶段总结,欢迎大家继续讨论


已有结论:目前用于培养基Ph值调节的主要有1N NaOH、1N HCl、NaHCO3和CO2,其中还有少部分战友在配培养基的时候加入了hepes,并且这些调节都是在培养基过滤之前调节的,

依然存在的问题:上述的调节方法都是在培养基过滤之前进行的,对于培养基过滤以后使用期间的ph调节很少有人讨论,只有111ading和唐朝风韵两位战友提到:配1N HCL灭菌后进行调整,但是这两位战友并没有讨论是如何灭菌1N HCL的,和灭菌后如何保存及保存时限。

下一步期待:期待大家讨论一下培养基过滤以后的ph调节所用的溶液的配制方法,除菌方法,除菌以后如何保存,保存条件,保存的期限。

比如:除菌方法的讨论,首先是否需要除菌,然后再谈怎样除菌。如果不需要除菌,为什么,比如有人说1N NaOH、1N HCl就不需要除菌,原因是强酸强碱里面细菌无法生长,但是也有人比如111ading战友说配1N HCL灭菌后进行调整,需要灭菌,那么到底需要不需要呢,请大家讨论?

再比如:ph调节液该如何保存,最多可以保存多少天,在什么条件下保存,是4度冰箱还是室温,请大家讨论?
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loli[使用道具]
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这个问题我是这么理解的:并没有说不能用HCL来调节PH值,其实只要了解了其中原理也就没那么困难了。
细胞生长需要一定的PH值来维持,我们一般用NaHCO3来调节,只所以用它,还是因为其的酸碱两性,可酸可碱,于是就用于调节PH值了。但是其也有缺点,即不稳定性,缓冲能力很差,有时候感觉效果真的很差,于是才引进了hepes液,其优点搜索即可。
现在来说HCL,将其配制成一定浓度的母液,是完全可以用来调节PH的,但是用此来调节你会发现,并不能一次调节,终身受益!需要反复的调节,这样一来,你原先的培养液可就不是真正原来意义上的培养液了,它有可能被这母液的HCL给稀释掉了,细胞状态自然就下滑了。
我的观点:NaHCO3是必须的,但是可以和HCL相互辅助,效果不错。至于hepes液,说真的,我们很少用到。
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盼盼[使用道具]
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一般在放了一段时间后细胞培养基确实会变碱,我们实验室的一般是配1N HCL灭菌后进行调整,少量调整,细胞状态也挺好的,没用过NaHCO3。
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tianmei001[使用道具]
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不能用HCL调节的可能的情况是细胞外cl-浓度对其细胞的培养或具体的实验设计有影响.
一般是没有问题的.
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ladyhuahua[使用道具]
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我们实验室用的也是GIBCO的培养基粉末,是DMEM高糖,一般情况下,加入NaHCO3后,PH值会偏碱,所以基本上都是用1NHCL调节,每次每升培养基加入的量也基本是固定的,也没有特地的再将HCL灭菌,因为后面还有0.22微米滤膜灭菌,基本上会滤掉细菌等污染物。每次配的时候不能配很多,否则放置时间长了之后,会发现培养基变了颜色,呈碱性。保证大家会在一个月之内用完就没什么关系,现在这段时间之来,也没出什么问题。所以用HCL调节PH值是可以的。另外我们的配培养基所用水是新鲜的UP超纯水,其电阻率为18.2MΩ-cm。
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hyuu[使用道具]
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用hcl调节是可以,起码我们是这样使用的。但是这个调节只是暂时的,因为HCL没有多少缓冲能力。所以我觉得只能作为辅助使用。另外NaHCO3虽然有一定缓冲能力,但是其缓冲能力是有限的。相对来说HEPES在这个方面具有很大优势。只是因为HEPES的价格相对NaHCO3来说比较高,所以很多人不会使用他。
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反正我们是用HCl调的。
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hold住[使用道具]
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前天晚上配培养基,刚配出来的偏酸,我用1N的NaOH调,居然加了快4ml,才刚刚到7.0,惊讶中,不知道这样养出来的细胞什么样!等有了结果我再告诉大家!
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二丫头466[使用道具]
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你想想你加进去那么多水,完了真正培养的时候还可能需要用酸来调节,那效果能好了么,一般的肿瘤细胞无所谓,遇到一些娇气一点的,有时候你都不知道问题在哪里
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