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标题:[讨论帖]如何把细胞养的更漂亮

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发表于 2012-1-4 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[讨论帖]如何把细胞养的更漂亮

[讨论帖]如何把细胞养的更漂亮      （转载）


1.不同的细胞，喜欢的环境是不一样的。

这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。

有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。

2.对于有些人总是会遇到养的细胞形态怎么都不好的问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不好，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：

首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞我们只吹打，不消化的）

其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。我称之为“二传”。呵呵。

如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。这个是我师兄发明的，谢谢他了。这个方法真的很好用！

3.关于培养瓶内加入培养基的量的问题。

这个是要靠自己去摸索你所养的细胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。（可能也是竞争很大，有优胜劣汰吧。呵呵。）对于生长速度快的细胞，易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。但是要注意换液掌握。

4.关于选择培养瓶的问题。

个人发现生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性塑料瓶相对好一些。而对于同一种细胞，在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比塑料瓶内好。这可能是因为塑料瓶比玻璃瓶更容易贴壁。生长速度快的细胞在塑料瓶这种相对“更安逸”的环境里反而长得状态不如玻璃瓶好。

所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，塑料瓶比玻璃瓶会好，对于生长速度慢的细胞，玻璃瓶则会更好。同样，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候，塑料瓶会好一点，比如刚刚复苏的时候，或者原代培养的时候。而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会好一点。

呵呵，暂时有这么些经验总结，再想到的话会补充的。有不对的地方还请斧正啊。
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铜雀[使用道具]
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发表于 2012-1-4 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我总结出来最后试验的结果好坏和细胞状态关系非常大的。所以希望能够多多交流，真正养好细胞。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-1-4 14:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我来顶一下吧 我也在养细胞 遇到了很多问题
在努力的一个个解决
唉 最怕就是找不到原因 有时候细胞状态不好 也不知道是哪里出错了 真是让人头大呀
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伊莎贝拉[使用道具]
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发表于 2012-1-4 14:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的是A549细胞，常常在传几代，就出现细胞颗粒感很强，时间一长就会在培养基中出现细胞少的颗粒，如果一消化就会出现大片死亡，常常养着养着就大部份细胞就老化，死亡了，请LZ及各位高手指点。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-1-4 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近我养的细胞中也经常出现黒渣现象，可以试试楼主的“二传”法。
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铜雀[使用道具]
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发表于 2012-1-4 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以试一试，这个情况我们用过，传了一次后好很多了，但还是会有一点。你传几次，应该会不错的。记得要洗一下，用滴管吸走。
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铜雀[使用道具]
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发表于 2012-1-4 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #4 伊莎贝拉 的帖子

你好，我对你这个细胞不是很熟悉，需要你自己摸一下情况。细胞颗粒感很强是不是细胞充水的缘故？你的培养基的渗透压是不是过小了。
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铜雀[使用道具]
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发表于 2012-1-4 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #5 whitesheep 的帖子

你可以试一试，这个情况我们用过，传了一次后好很多了，但还是会有一点。你传几次，应该会不错的。记得要洗一下，用滴管吸走。
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伊莎贝拉[使用道具]
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发表于 2012-1-4 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
培养基的渗透压过少，这个没想过，因为前面的师兄们都是这么养的，这个可能不是问题，这几天发现培养基中飘着密密的充满细少的颗粒，很多细胞轮廓都很不明显了。我想这是不是因为支原体或衣原体感染，长到一定程度，就裂解细胞，飘着的是裂解的细胞碎片。请分析指导。
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tieshazhang[使用道具]
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发表于 2012-1-4 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主，请教个问题。
我们养的是大鼠骨髓间充质干细胞，细胞传到三代之后，总共40多瓶，大概过了又有两三天，实验室用甲醛熏蒸了下，结果第二天发现细胞死了好多，大概20瓶死亡了，死亡的瓶子都有颗粒状的沉淀贴附在瓶底，但是轻轻摇动就会脱壁。我们以为是个别小瓶培养基污染，因为我们培养基是封装到小瓶的，我们怀疑是细菌污染了，专门分装出前面用过的小瓶培养基培养，24小时也没有细菌生长，也没见到真菌，现在就是不明原因。请楼主帮我们分析下，谢谢。而且发现之后我们就马上新配了培养基，把没有污染的全部都换液了，结果今天早上一看，又有8瓶变成那种“污染”的样子，现在不知道怎么办~
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