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标题:[求助]Raji细胞培养

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发表于 2012-1-6 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]Raji细胞培养

[求助]Raji细胞培养


各位兄弟姐妹：
我养的Raji细胞培养过程中状态是时好时坏，状态好时细胞大多贴壁，轮廓也很清晰，但是这种好的状态每次都持续不了几天，不过一周细胞就开始出现大规模的抱团，即使吹打开后，又很快抱紧，一般不超过两周细胞就出现崩解，细胞轮廓变的不清晰，培养内出现很多碎片。也不像是污染啊，我一直搞不清。
现在更郁闷的是我发现早先冻存的细胞好像也复苏不活了，复苏后活细胞很少。我用的培养是1640，血清为四季清的胎牛血清。
现在真的是很郁闷，恳请各位养过Raji细胞的战友给我以指导帮助啊，谢谢！
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-1-6 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Raji细胞本来就是悬浮细胞，并且是成团生长的，抱团是正常的现象。

至于冻存复苏的问题，我们也遇到这种问题，不过等两天就好了。
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发表于 2012-1-6 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 rxcc33 的帖子

同意你所言。冻存复苏开始时状态长得比较差,不过我提高了血清浓度(20%),转到T25瓶并且传代勤快点,这样就可以了。 可以试试看。
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发表于 2012-1-6 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养过这个细胞，是不太容易养的。需要经常传代，如果等老了，再传就太晚了。另外，培养基用是要温裕。这个细胞太脆弱了。希望你养好。
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发表于 2012-1-6 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位群友的指导，可是我现在非常心痛的是发现我复苏的细胞，满是碎片，即使有点发亮的，仔细一看，细胞形态已经不太规则了，看来活的希望不大，伤心啊
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发表于 2012-1-6 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #5 气泡 的帖子

提高血清浓度(20%),最好用点HYCLONE的CLONE1血清,效果不错!
另外要有耐性,等几天就会疯长的!我有次复苏Raji细胞过了一个星期才疯长,也把我急死了!等它长好的时候再把血清换成NBS血清(10%).
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-1-6 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

3个字：勤换液！！！
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小糖块[使用道具]
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发表于 2012-1-6 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位群友，我养Raji细胞已经有段时间了，我是做药物毒性试验的，MTT做了5遍都统统污染了，我都快郁闷死了。其间做过各种分析，排除了药物、器具、全培的原因。我的两个师妹也帮我分别做了几次，也都污染了。在养Raji细胞的这段时间，我发现了一种现象：每天换液，细胞会长的很好，高倍镜下个个形态规整，透亮度高；一旦2天不换液细胞里面就会出现很多细菌。跟同实验室的人交流，他们说细胞一开始可能就污染了。我奇怪的是，如果一开始就污染了，那Raji怎么还是会长那么好（每天都传代）。
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阿敏[使用道具]
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 小中大

我估计细胞肯定冻存的时候就有问题了。有的时候也不一定叫污染，就是那种脏的东西，但是培液看上去又还挺清澈的。这些污染源和细胞我感觉其实也是一种竞争抑制的关系，你长的好，我就长不好。我养MCF-7的时候也是出现这种情况，勤换液会收到很好的效果，另外，换液的时候要离心把原来的培液都弃掉，然后记得用绝对无污染的PBS洗2遍，会收到很好的效果
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