细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]消化后，EDTA的残留问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 12  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]消化后，EDTA的残留问题

junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
1

发表于 2012-1-7 08:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]消化后，EDTA的残留问题

[求助]消化后，EDTA的残留问题


我用0.25％的胰酶和0.02％EDTA消化细胞后，再加含10％FBS的培养基传代，胰酶被血清中和掉，EDTA的残留怎样解决？影响细胞贴壁吗？我怎么消化后，有些细胞不能贴壁，导致死亡。
顶部
阿敏[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74162
精华 0
积分 298
帖子 316
信誉分 100
可用分 2356
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
2

发表于 2012-1-7 08:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你消化后，倾倒或是离心除去加入的胰酶溶液吗？如果不当时除去在细胞完全贴壁后要求换新鲜培养液。EDTA对细胞有害，有报道对细胞有致变异的作用。还有，你消化时是不是加了很多胰酶？其实只要可以浸润所有细胞就可以了。
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
3

发表于 2012-1-7 08:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

离心10分钟~~~~~~~~~~~~~~~·
顶部
北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
4

发表于 2012-1-7 08:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们这里好像EDTA都没去管他，细胞贴壁影响似乎不明显。书上是说要把EDTA洗掉的。
顶部
hyuu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79232
精华 1
积分 626
帖子 847
信誉分 102
可用分 5149
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
5

发表于 2012-1-7 08:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

EDTA能螯合钙离子，使细胞脱落瓶壁。应该离心洗去EDTA，但是不同的细胞可能有不同的敏感性。
顶部
junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
6

发表于 2012-1-7 08:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位，我把胰酶和EDTA去掉，看看结果是怎样的。
顶部
tieshazhang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74105
精华 0
积分 338
帖子 436
信誉分 100
可用分 2916
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-5
状态 离线
7

发表于 2012-1-7 08:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

给你提供一个消化的方法，用来很好，你可以试试。消化时加入胰酶和EDTA后等待30秒后将胰酶和EDTA吸出，放入37℃培养箱中放置3——5分钟，这时细胞基本消化完全，再用培养基轻吹细胞即可。这种方法既可以完全去掉胰酶和EDTA（EDTA会影响细胞贴壁），又可以避免消化时间不够难以吹打，又可防止消化时时间掌握不好消化过头使细胞流失，方法是在书中查到的，我一直在用，感觉很好用，建议群友试用一下。
顶部
junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
8

发表于 2012-1-7 08:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用你的方法消化了细胞，消化效果很好，刚才看了看细胞，大部分贴壁了！
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
9

发表于 2012-1-7 08:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在做消化时，一般都是将消化液加入后，约一两分钟，将消化液吸出，再消化一两分钟后加入新鲜的完全培养基。时间可根据细胞的不同作调整。基本跟wqrainsun的方法相似，就是省去了放回37度这一步。一直用的这种方法，很少有消化过渡的情况，也不用考虑EDTA的残留。
顶部
阿敏[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74162
精华 0
积分 298
帖子 316
信誉分 100
可用分 2356
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
10

发表于 2012-1-7 08:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这样吹打下来的细胞就不用离心了对吗？

请问tieshazhang群友："给你提供一个消化的方法，用来很好，你可以试试。消化时加入胰酶和EDTA后等待30秒后将胰酶和EDTA吸出，放入37℃培养箱中放置3——5分钟，这时细胞基本消化完全，再用培养基轻吹细胞即可。这种方法既可以完全去掉胰酶和EDTA（EDTA会影响细胞贴壁），又可以避免消化时间不够难以吹打，又可防止消化时时间掌握不好消化过头使细胞流失，方法是在书中查到的，我一直在用，感觉很好用，建议战友试用一下。"

谢谢！
顶部
 12  1/2 12››