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标题:[求助]细胞消化过度怎办?

bongte[使用道具]
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[求助]细胞消化过度怎办?

[求助]细胞消化过度怎办?


大家好,我的细胞消化多度了,当时看到都哗哗的往下掉了。现在养了两天,有些飘起来,也有两三个聚在一起,也有挺多帖璧的,但是感觉状态还不好。由于科室没有此细胞的冻存,所以得养好。大哥大姐,现在有有什么好的办法补救下?急中......
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ladyhuahua[使用道具]
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没什么的~~只要当时没有掉消化液是直接加生长液终止消化的就没什么关系哈~~~对细胞没有很大的影响的
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ffooll[使用道具]
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根据经验:
如果你的细胞很珍贵,而你所剩下的不多的话,那你就用来消化的胰酶接着吹打细胞,把细胞都吹打下来,找2个刚高压的EP管,然后把悬液转移到EP管中,然后离心,吸走上清,用培养基吹打后,再转移回培养瓶就OK了,只要你保证操作在无菌的环境中就可以了,我经常这样做,没有关系的,祝实验顺利!
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milkdog[使用道具]
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我的细胞掉的时候,我立即就加上培养基中止了,但是细胞的状态还是这样。
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milkdog[使用道具]
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回复 #3 ffooll 的帖子

我还有个问题想问您,细胞离心后,状态不好的细胞不还是在吗?
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caihong[使用道具]
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马上用培养基中和,用吸管吹打细胞,收集全部的细胞到以无菌的离心管中800RPM 3分钟。弃上清,用全培重悬,换新的培养瓶继续培养!!状态不好的细胞在培养的过程中会死亡脱落,在换液的时候可以清除掉!!
胰酶过度消化造成细胞壁的损伤可以在细胞培养的过程中自己可以修复的!!
祝你好运!!
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中国特色[使用道具]
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一般细胞消化到掉下来是没问题的。如果针对你这种细胞来说是消过了的话,那接下来最要紧的是立刻加入培养基终止胰酶对细胞的继续作用,而不是用直接用胰酶吹打。加入培养基的量约为胰酶的1-2倍,然后离心去上清,培养基重悬,这时应该注意将细胞吹散,因为一般胰酶消化过度之后细胞容易聚集成团,不吹散的话会严重影响细胞状态。吹打不宜过猛,20下左右,肉眼完全看不到颗粒状悬浮后再吹几下就行(当然你视力要好^^)。
另外,细胞状态不好有的可以恢复,有的不能恢复。如果是可以恢复的你只要好好继续培养就行;而不能恢复的话状态不好的细胞以后会挂,换液除去漂浮的死细胞就行了,一般不用特意去除状态不好的细胞。
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ladyhuahua[使用道具]
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你可以往培养液里面多加点血清,我碰到消化过头的细胞飘起来就往里加血清,大部分情况下都能让它们重新贴壁且状态良好,建议试试
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吴才子[使用道具]
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我碰到过这样的情况,我觉得主要是胰酶的浓度高了,马上重新配过胰酶,把浓度降低,至于你的细胞很悬,因为很多细胞都被消化死掉了,所以背景里有很多细胞碎片,这样对细胞的生长是有影响的,建议你每天都要换培养基,细胞长到一定程度就消化,长满是不可能的,当然要用新配的胰酶,细胞的吹打不宜过猛,分两瓶,在用较多的血清培养,关键是多分几次瓶,这样有可能能救过来!
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