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标题:[求助]怎样分离肥大细胞

wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]怎样分离肥大细胞




从那个部位分离肥大细胞最好
怎样分离，怎样培养
我是要测肥大细胞的组胺释放
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大鼠腹腔肥大细胞
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我要做兔的肥大细胞，皮下的肥大细胞
怎样分离呢
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

查了一下，不过没查到兔子的，是大鼠的，我想无非就是消化液时间的差异罢了，步骤应该是一样的了。我按原步骤列出你自己酌情删减添加好了。
1。大鼠经乙醚麻醉后放血处死(我觉得可以颈锥脱臼处死),剔除腹部皮毛，用乙醇消毒后，切取4cm×3cm重约1g的皮片
2。分离除去皮下脂肪，用改良的Tyrode液清晰皮片
3。将皮片剪切成1mm2大小的小块，放入三角瓶中。按每克皮片加入25ml笑话也的比例进行消化。拧松瓶盖，入37度，5％CO2，饱和湿度培养箱内孵育4小时。
4 再37度条件下，用磁力搅拌器搅拌消化物45分钟
5将消化物静至片刻，待残留的组织块沉到瓶底后，用注射器吸出上层悬液，存放于另一容器中
6将残留的组织块用注射器挤压分散，再用吸管充分吹打以分散细胞，静置片刻后，尽量吸出上层悬液，与前面收集的悬液混合
7以孔径为0.75um的不锈钢滤网过滤悬液，除去组织碎片和较大的细胞团，收集滤液
8在4度条件下离心滤液(150g,5min），弃上清液，用冰冷的Tyrode液重新悬浮沉淀，再离心，弃上清液
9用培养液悬浮细胞，计数细胞密度。鉴定并计数肥大细胞，得出比例
10调节细胞密度
11接种
12培养12小时之后，可根据肥大细胞黏附性较差的特点，纯化肥大细胞

good luck!
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你能吧腹腔肥大细胞的分离步骤也告诉我吗
谢谢了
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笑弯了腰[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你分离出没有,我也正在做腹腔肥大细胞的分离 ,可以讨论么？
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
断颈处死Sprague-Dawley大鼠，向其腹腔中注射10 mlHepes buffer后，按摩腹部8-10 min，剪开腹部，吸出腹内液体，离心(800-900 rpm, 5 min)，吸出上清，再加入缓冲液I清洗一边，同样离心(800-900 rpm, 5 min)，弃上清.冲悬浮就是腹腔细胞，包括肥大细胞。要富集，就可以利用ficoll密度梯度离心的方法富集。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在做肥大细胞的分离培养，一直不成功，急需和志同道和的人讨论一下呀
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不同组织的分离方法应该差不多吧
脑内的能用吗？
分离出来怎么纯化呢？
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也要做肥大细胞的组胺释放实验，是做致敏模型的，你是怎么做的，能不能告诉我呢？
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