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标题:[分享帖]细胞实验原创经验（教科书所没有提到的）

西子[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[分享帖]细胞实验原创经验（教科书所没有提到的）


（转载）

在细胞实验室，有很多经验很难总结在书本上，但是与整个实验的成功却密切相关，现在建立新贴，想到哪里说道哪，随时补充并建议高手随时添加内容，大家共享自己实验中积累的小窍门。

1）细胞冻存管一般有1.5-2ml左右体积，原则上可以存放1.5ml充满均匀悬浮细胞的冻存液，一些人喜欢灌注1-1.5ml冻存液冻存，这实际上并不好。原因如下：冻存液冻存需要一段时间，如果这段时间冻存管倾斜，液体容易流到管口，很容易在后续的操作中造成污染。建议0.5-1ml之间即可。

2）许多教科书推荐细胞解冻用37度水，本人发现温度可以适当提高，39度也没有问题，虽然只提高了2度，却可以加速细胞解冻的时间。解冻后有提点挺重要，迅速用75%乙醇消毒冻存管管口和双手，然后进入下一步工作，随时别忘无菌操作。

3）当无菌操作台经常有多人工作时，记住自己用时，尽量把各种实验用物在紫外灯下消毒30-40分钟， 包括枪头，移液器，废液缸等容易忽略的物品。但是，不要让胰酶和培养液处在紫外灯照时下！

4）准备用实验台时，关掉紫外灯的同时，应打开鼓风机，如果操作太两边都有风机旋钮，应该保持两边风机风速一致，而且应该大于100，以免飞虫进入（当然不能吹灭酒精灯火苗）。最好再用75酒精蘸洁净一次性纸巾擦试所有可以消毒的地方，尤其是工作面。

5）如果不是通过两个圆孔进入手臂操作，而需要抬高操作台前置玻璃挡板，一般不要超过15厘米，主要目的还是减少污染几率。
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yes4[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
写得不错！自己也做了一段时间的细胞培养了，也写一点冻存细胞的经验，权且作为抛砖引玉吧！
我冻存细胞时还是用1.5ml的，具体操作时，我把冻存管直立起来放在-20的冰箱里，这样问题就解决了！
同时冻存细胞的时候，一定加上封口膜，这样可以避免复苏的时候，水浴箱里的水进入盖子的缝隙中！
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻存细胞时我一般加1.2-1.5 ml，解冻温度设到40度，复苏效果很好
废液缸我们是用75%的酒精消毒后拿进去，各种试剂瓶拿进超净工作台时都要用75%酒精擦拭，支持楼上两位。
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
支持楼上!
我也做过一些细胞实验,感觉如果无菌操作不严格,很容易造成污染,导致实验失败,以下也有几条经验跟大家分享一下吧:
(1)做实验时保持白大褂的干净.尤其不是通过两个圆孔进入手臂操作的实验台,白大褂的干净整洁(尤其是袖口处)可直接影响到实验的染菌几率.并最好不要把袖子掳起直接进去操作,因为我们皮肤表面可能会有细菌滋生.
(2)保持实验台的干净整洁,尽量保持实验台上所放物品少一些,并且保持实验台里的东西是专台专用.
(3)初学者常常会将瓶口、瓶盖在火上烧灼的时间少一些来减少染菌的几率，其实这样往往会加大染菌的机会。正确的做法是在火上烧灼片刻后（外焰）立即盖上，并保持一定的通气量，水平放置。
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
支持楼上!
细胞试验关键是无菌操作!
而且不同的细胞,要用一周左右的时间摸清楚它的生长规律,这样对于以后的实验很有帮助!
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大尾巴[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
支持楼上各位的意见，有关细胞冻存与复苏，我也总结两点：

1 冻存管外面用封口膜封上后，最好再用白胶布再封一下。这样可以防止细胞复苏时，封口膜崩裂，水浴箱中的水进入冻存管。
2 水浴箱是个大问题，我们实验室有次细胞很严重的污染事件，哪里都没出问题，后来查了水浴箱中的水，发现了很多大肠杆菌。所以建议水浴箱一定要及时将脏水倒掉，然后用75％酒精擦洗箱内，最后换上蒸馏水。
3 水域温度我觉得39——40度比较好，因为以前我38度复苏时，一般一分钟内不能融化细胞，细胞存活率也不好，而40度时细胞的存活率满高。
4 还有就是提醒象我这样马虎的同学，细胞冻存在4度，或－20时就忘了，我干过好几次这样的事（这几次细胞种很好，很心疼），其实可以将冻存细胞时用厚厚的棉花把冻存管包起来，直接放进－70度冰箱，复苏效果也不错。
总之，养细胞是件及其麻烦的事情，需要超级的细心与耐心，有一点是大家需要牢记的，你对细胞的态度，与细胞对你的态度是成正比的，你糊弄它，它就不会好好给你长，或者污染，或者死亡，在时间和金钱上给你带来损失。
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.我觉得拿个烧杯盛蒸馏水加热到复苏温度然后放到水浴箱这样做就可以避免楼上的2问题了。
2。买个程序降温盒会较好的。
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baidukk[使用道具]
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 小中大
怕袖口污染可以出去做一些布的袖套，高压灭菌，反复使用，便宜且效果好。
推荐蒸馏水40度复苏，有上述优点。
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misswu61[使用道具]
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发表于 2012-1-14 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.在冻存细胞的时候加大血清的比例，到复苏的时候死的细胞数相对少， 如果有条件的话用全血清冻存效果更好
2.细胞室在使用前最好用福尔马林进行熏蒸一下，比较安全，每周至少用消 毒水去擦细胞室地面一次，
3.血清从-20度中取出后要进行缓慢化冻，否则容易形成沉淀，使用前最好离心会发现有沉淀物。
4.注意血清是否需要灭活
5配置细胞营养液的时候，PH一定要用酸度计测准确，而且有必要检测其渗透压
说的不好请大家多指教
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911[使用道具]
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 小中大
本人养淋巴细胞 ，冰冻过的全血提不出淋巴细胞。
本来我们是打算养神经细胞的，但是太难了，养不活，为了毕业改养淋巴细胞了，但是养神经细胞的一套试剂我们都买了，哪位有养神经细胞的经验？给传授一下，养完淋巴细胞我们还想养养神经细胞。
谢谢！
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