细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]流式PI结果分析

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 12  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]流式PI结果分析

dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
1

发表于 2012-1-14 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]流式PI结果分析



各位流式高手，能帮我分析一下我的PI单染的流式结果吗？由于是新手，对流式结果分析一窍不通，我是要检测细胞凋亡的，不知道左图中最左边的贴着竖轴的那个峰是不是凋亡峰，如果是的话，凋亡率应该是多少呀？最右边多出来的峰是啥呀？谢谢啦谢谢啦！


查看积分策略说明
附件
2012-1-14 12:09
17452068.snap.jpg (55.56 KB)
 
顶部
eric930[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79368
精华 0
积分 722
帖子 1061
信誉分 101
可用分 6148
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
2

发表于 2012-1-14 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不建议只用PI单染检测凋亡。
顶部
duoduo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74511
精华 0
积分 705
帖子 1009
信誉分 100
可用分 5926
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
3

发表于 2012-1-14 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先你前面的峰不是凋亡峰，是典型的斜肩峰，也就是细胞中DNA的碎片峰；接下来，你犹豫前面去粘连体的那个脉冲宽度和脉冲面积的图没有把粘连体去除，所以你在DNA图中后面会出现哪些貌似多倍体的小峰。
要是第一次做周期的话，你这个图做得算是漂亮的了。只是没有凋亡峰而已，这种方法要想检测出凋亡峰是比较困难的，和很多因素有关系比如收细胞的时间点以及诱导凋亡的方法和细胞类型等。一般来说凋亡都会用凋亡试剂盒来做。
你要是只是检测周期的话，这样的图就可以了，你可以让给你做的人用MODFIT给你分析一下，直接给你结果就好。还有，在做的时候这两个图都是有的，你应该让做得老师给你一一讲一下的，不要怕问。
顶部
HP007[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74166
精华 0
积分 446
帖子 612
信誉分 100
可用分 3833
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
4

发表于 2012-1-14 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不建议只用PI单染检测凋亡。

======================================================

你好，我也是刚学做流式，请问ＰＩ单染和AV/PI双染有什么区别啊？
顶部
dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
5

发表于 2012-1-14 12:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先你前面的峰不是凋亡峰，是典型的斜肩峰，也就是细胞中DNA的碎片峰；接下来，你犹豫前面去粘连体的那个脉冲宽度和脉冲面积的图没有把粘连体去除，所以你在DNA图中后面会出现哪些貌似多倍体的小峰。
要是第一次做周期的话，你这个图做得算是漂亮的了。只是没有凋亡峰而已，这种方法要想检测出凋亡峰是比较困难的，和很多因素有关系比如收细胞的时间点以及诱导凋亡的方法和细胞类型等。一般来说凋亡都会用凋亡试剂盒来做。
你要是只是检测周期的话，这样的图就可以了，你可以让给你做的人用MODFIT给你分析一下，直接给你结果就好。还有，在做的时候这两个图都是有的，你应该让做得老师给你一一讲一下的，不要怕问。

===============================================================================================================

你好，非常非常谢谢你的回答。请问我后面的多倍体小峰和是什么原因会出现的，应该如何避免呀，还有我的碎片峰也很明显，怎么操作才能减少呢。
顶部
moonlight45[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79769
精华 0
积分 487
帖子 654
信誉分 100
可用分 4096
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
6

发表于 2012-1-14 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你做的是用PI染DNA?看看哪些凋亡的，其实用PI+ANNEXINV更好些，可以看到早凋和晚凋的比例
顶部
dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
7

发表于 2012-1-14 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #7 moonlight45 的帖子

我一开始也想用双染，那样好处结果点，但是老板就说想做周期的，可能省钱也是一回事吧。现在还没做出凋亡峰来里，要么没有，要么就碎片多么高的峰，就是出不来凋亡，好着急呀
顶部
bohe221[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74583
精华 0
积分 419
帖子 457
信誉分 100
可用分 3228
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
8

发表于 2012-1-14 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

图好奇怪。
首先，散点图分的很不清晰，没有明显界限。其次，在直方图中紧贴枢轴的峰明显是因为操作不当造成的。第三，你的states也好奇怪。。。你用的应该是BD的流式机器吧，，，，跟我们的states模式基本是一样的，这种图直接用机器自带的Modfit里面的一个Auto，就直接出结果了，，，前面几个选的时候注意FL-A,FL-W好像是P6,P7
顶部
dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
9

发表于 2012-1-14 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
图好奇怪。
首先，散点图分的很不清晰，没有明显界限。其次，在直方图中紧贴枢轴的峰明显是因为操作不当造成的。第三，你的states也好奇怪。。。你用的应该是BD的流式机器吧，，，，跟我们的states模式基本是一样的，这种图直接用机器自带的Modfit里面的一个Auto，就直接出结果了，，，前面几个选的时候注意FL-A,FL-W好像是P6,P7

=============================================

恩呢，前面估计是碎片里，用的BD流式机器，选的是FL-A
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
10

发表于 2012-1-14 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我这边有BD的全套培训资料，有些事纸质的也有部分是电子版的视频，不知道你那边是不是有。
再者，我发现了一个问题。你要是能直接操作流式的话，注意在Defin Gate（Modfit里面的第二步还是第三步）的时候，必须要射门。就算是这幅图，看你的states里面，“Gate：No Gate”这肯定就是分析的问题了。你可以设完门，看下states是不是会好些，注意的是在“show inspect”（好像是这个单词，我本科生，记不清楚。在 ACQ里面）里面点中第二幅图的时候别忘了“Gate=R1”
顶部
 12  1/2 12››