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标题:[讨论帖]实验室成败经验

阿敏[使用道具]
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[讨论帖]实验室成败经验



(转载)
谈谈你在做与细胞相关实验中的体会和收获,或喜或悲,一路从实验中走来,我们一定都感触颇多,细心观察和思考一下,做实验以来,你是否犯了很多的小错误,是否经历了一些实验的失败?是否又摸索了很多成功的经验,那么你是如何调整和思考的呢?这些体会有很多都不是能从书本上得到的,为什么不让大家一起来分享呢?每一个细节,每一份体会,都可能会给别人带来更多的便利,同时,你也一定会从别人的经验中收获许多。

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阿敏[使用道具]
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呵呵,我先抛砖引玉吧,其实实验中感触也是很多的。
记得刚养心肌细胞时候,开始时候很顺利,但有一次突然细胞就不怎么贴壁了,换液时候一吹打,就发现有许多细胞脱落。我检查了培养箱,可是别人的细胞都长的很好啊,培养基的问题?我仔细观察了一下,培养基粉红透亮,绝对不会污染,血清也没有问题啊,大家都是公用的血清,当时我很迷惑,后来我象老师如实反映问题,他听完我的叙述后想了想,让我把培养基拿给他看,然后告诉我,你的培养基颜色太深了,肯定偏碱,细胞在偏碱的情况下培养,耐受能力会逐渐下降,可能是产生脱壁现象的原因,后来我重新测了一下培养基,为7.5左右,我用灭菌的HCL调了一下,培养基颜色变成淡红透亮,再次培养,发现细胞贴壁比较好了,搏动效果也不错,因此,我以后每次培养前都要重新调好PH值,我觉得很多因素是能影响PH值的,这也算是实验的一点收获吧,呵呵,当然还有别的体会,以后慢慢说吧。
我也就养过几种常见的细胞,群里有很多养细胞的高手,我需要好好请教学习呢,希望都能给大家在这里留下一些宝贵的经验,从小的来说,是热情的帮助别人,从大方向来说,也给中国的科研出一份力,展现自己存在的价值
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盼盼[使用道具]
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我也来一个,刚开始养MOLT-4细胞的时候,细胞状态一直没有传说中好(前辈),常常发现胞内有很多颗粒,亮度也不够,但是增殖却挺旺盛。还以为这大概就是正常的,冻存了几管,结果复苏后状态更差,很郁闷。后来请教一高手,怀疑是营养不够,就换用20%的小牛血清培养(之前用的10%),状态果然转好,成团细胞增多,一团团象葡萄一样,看了就高兴!再后来,又换用新买的一批血清,20%时长的更好,调到10%也长得不错。估计以前是因为那批血清质量不好,影响了细胞生长。所以,我认为以后养细胞,用的血清浓度最好是每批次血清都摸一下,不一定要以参考文献为准,毕竟国产的血清质量差异比较大啊。
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yes4[使用道具]
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我的实验感受:在做实验时经常会有一些低级错误的发生,例如,我在做细胞免疫组化时就发生了这样的一个错误:我的细胞是养在24孔板里的,细胞固定时我就直接加入了丙酮固定,结果扳子里面一片白白的,这时才赶紧询问他人,方知塑料制品会被丙酮所溶,真是好笨啊,另有一次,我 做 细胞爬片 时,因为觉得盖玻片不好处理,就自做主张地用了载波片(那可是我 自己花钱去做的 小波片呀),结果是虽然细胞长在了上面,但是用荧光显微镜观察细胞染色情况时却怎么也看不清楚(以后换用了盖波片就好了),被实验室主任训了一顿:谁让你自做主张换波片的?唉,不仅花了钱,浪费了 时间,白费了心血,才得出这样的结论。望xdjm做实验时一定要多咨询多请教噢。因为我所犯的 错误既往都有发生过。
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tieshazhang[使用道具]
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我觉得养细胞无菌操作是关键,对于配制培养液时,有些人为了让培养粉充分溶解,搅拌4小时或更长时间。其实这完全没有必要,一般培养基的固体组分还是易溶于水的,搅拌的时间长了会增加污染机会,虽然后来滤过除菌了,但细菌的代谢产物比如脂多糖谁能够把它滤掉?细菌的代谢是很快的,甚至在常温下20min就可以繁殖一代,太可怕了。我的经验就是搅拌30min-60min就把它过滤。
另外关于培养基的pH问题,一般按照说明书操作,加入所说的NaHCO3量,与预计的pH不会有什么距离,也就是说基本上不用调pH,如果相差大,要考虑三蒸水的质量是否有所下降,当然这时调pH也是不得已而为之。我配培养基时基本上不调pH,只是用试纸检测一下pH,观察一下培养基的颜色。
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hyuu[使用道具]
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刚开始做彗星实验的时候,按照实验步骤一步一步的做,电泳完发现胶全脱了!哭啊!怎么想也觉得没做错啊,问了一个师兄,方才知道,载波片要先泡酸,洗净后再泡乙醇,用前再拿出来。试了试果然不错!高兴极了,拿着染好的片子去看,发现背景so红,简直什么也看不清,又郁闷了!于是又东找西找,在园子里发现,有人染好后,将染液冲掉的,又试了试,果然!其实做实验的时候,有很多细节没写在实验方法上,还是要先请教一下做过的人,仔细看一下有关的文献之类,才不会多走许多弯路啊!
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乌贼老弟[使用道具]
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鄙人也算养了快一年的昆虫细胞了,而且最近又在做昆虫血液的原代培养,积累了点点经验(也许在高手看来根本算不了经验,贻笑大方啦),说出来大家共勉:首先,要广泛阅读细胞培养方面的专业书籍,打造自己扎实的专业基础,为以后的操作作准备,这方面的书有很多,《体外培养的原理与技术》,薛庆善主编,科学出版社;《细胞实验指南》,D.L.斯佩克特,etc著,黄培堂等译;《细胞培养》,司徒镇强,等等……其次,每种细胞的培养条件都不相同,别人的经验和书本上的protocl都只能作为参考,真正重要的是自己培养过程中的不断摸索,这就需要对自己培养过程中细胞出现的状况作详细记录,随时总结。再次,培养者极大的耐心,而过程中的影响因素又很多,这又需要培养者必须综合细胞培养是“细活”,其过程需要考虑各种影响因素,当出现问题时一一加以排除,找到最佳解决方案。我在这里没有讨论细胞培养的细节问题,因为那样的话是说不完的(也许有朋友会认为我在泛泛而谈,呵呵),暂且说到这,我去处理细胞了,以后再说……
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BUK[使用道具]
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说起细胞培养,要说的确实很多。我就怎样防止污染说说我的体会。每个人都担心细胞被污染,每个人都碰到自己的细胞被污染。起初我学习细胞培养的时候,都是向师哥,师姐学习。基本上就是依葫芦画瓢。随着时间的推移,自己也就觉得有些步骤可以省略,有些就要注意。我个人认为比较重要的几点如下:(1)东西一定要用自己的。既不要借别人的,也不要借给别人。可能大家觉得比较自私。实际上还是很有好处的。并不是每个人的操作都规范,因此相互之间串着用,很容易造成交叉污染。(2)我习惯口对口倒液体,在倒前倒后都要在酒精灯上过一下。自己认为比起用吸管吸更能很好的防止污染。步骤越简单,越能防止污染。而且还能节省很多吸管。(3)一次将所有的所需要试剂、工具放入工作台。不要做到半路,又出工作间拿东西,这样增加了污染的机会。(4)整个操作要快、动作要轻、而且不要干其他的事情。比如手机响了,最好不要接。我一般操作的时候将手机关了,手机声音响起,好烦躁。(5)我一般开紫外线照射台的时候,就将培养基、酶、DHANKS液那到室外让它自然升温。这样40分钟后,温度也升上来了。有很多人将他放到37度水浴锅里加热。一定要注意水浴锅的卫生,有的常年不清洗,里面很脏,容易在外面瓶身上吸附大量细菌。因此用它的也一定要勤换水。从水域锅那出后,最好找个毛巾插干上面的水。(6)操作前要洗手,用75%酒精搽手。(7)用完操作台,要打扫卫生。(8)细胞要经常冻存,我一般只要细胞状态好就将细胞冻存起来。细胞状态差了,扔掉,重新复苏。这是一个必须养成的习惯。毕竟很多情况下,细胞并不是因为污染了,才让你感到头痛。这样你不会担心没有种子了。(9)我一般是不加双抗的,只要注意,不会污染。
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北风那个吹[使用道具]
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怎么说呢?细胞培养的过程--痛并快乐着!
老师告诉我细胞培养与我的课题密切相关,我能不听吗?不能!
懵懵懂懂 地开始了学习,准备,预试验,实验。。。
当经历了失败,挫折,懊恼,郁闷;
硬着头皮询问,查阅,反思,尝试;
逐渐开始了解,见效,成功,喜悦,
这时,老师告诉我暂时放放!!
??我不知道说什么好,还能说什么!
这是我的痛!
但在细胞培养中还是有所收获,实验中我知道日常生活所谓的“清洁”与实验要求的“无菌”相去甚远!有好几次,实验中情急都不由的想去吹吹!哈哈,还好,戴着口罩!其次,发现细胞培养真是个淘冶情操的活动,无论你性子多急,脾气多燥,不想事倍功半的话,最好老老实实,小心翼翼,按部就班地操作!半点马虎不得!最后,谈点实验心得,开始时总是刻意摩仿,简单操作,什么都不求甚解,结果是不断遇到问题,不断向别人请教,而别人只能提供通用的解决办法,对自己的问题没有什么帮助,最后还是要自己摸索才能解决!费时费力费工!慢慢发现细胞培养很重要的是,自己只要了解试剂中每种成分的作用,实验中每一步的意图,遇到的问题就会迎刃而解!其实是就没什么问题了!◎
这是我的快乐!
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pengke1983[使用道具]
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开始养细胞的时候,实验室里只有一个师兄是养过的,很多东西不懂,刚开始师兄只肯让我洗管子,在旁边看;后来自己一步步学起来,看了很多资料,自己买耗材,去上海细胞库买细胞,配培养基、消化、冻存、复苏。刚开始犯了很多错误,消化的时候严格按照参考书上写的来,结果5分钟后细胞全死了;冻存的时候在-20度放置时间过久,结果复苏的时候一管细胞活下来的就十七八个,把含细胞冻存液的培养基吸走加入新鲜培养基的时候观察培养瓶,发现培养瓶简直比我洗的还要干净;后来知道光看参考书是没有用的,相同的细胞在不同的条件下实验条件也不同,需要自己摸索,参考书只能参考,不能照搬,现在差不多一个人同时养5个细胞没问题。还有我比较勤快,细胞室大部分时间都是我打扫消毒的,虽然累点,但是细胞不污染,比什么都强。
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