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标题:[求助]脂肪细胞培养，图片观察细胞怎么了？

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发表于 2012-1-18 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]脂肪细胞培养，图片观察细胞怎么了？




各位同学大家好：

我目前在用组织块消化法来培养原代的脂肪细胞，一直不太顺利，细胞成活率很低。

细胞培养到第3-4天就开始出现途中所示的较大的细胞碎片，又好像不是细胞，但里面有很多碎片，我们称之为“死亡信号”，一看到这种样子出现，我们就知道细胞不用再养了，它不会再长了。请大家帮忙看一看，细胞是怎么了，那些较大的里面有碎片的是什么？

对了，细胞成活率较低，不知究竟是什么问题，应该不是污染，我们已经加大了组织量，以为组织增加会使前脂肪细胞增多，有利于细胞培养，但是现在看来，细胞成活率较低跟组织量也没有关系，请大家分析一下，谢谢！！


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duoduo[使用道具]
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发表于 2012-1-18 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
脂肪块消化后应进行离心，将最上层的油脂吸掉，中层的消化液也吸掉。只留管底的细胞加入培养液培养。图中的大圆的是融合的脂肪滴吧，基本没见几个细胞吗。
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发表于 2012-1-18 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

刚刚接种完，是有很多细胞的。

我们是严格按照操作流程来办的，消化--离心--红细胞裂解--滤大网--离心---滤小网--离心--接种，

我觉得不是融合的脂滴，中间还有 很多暗色的部分...

请大家帮忙。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-1-18 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也刚在摸索，诱导不好，不过你这个看上去不是前脂肪细胞呀。你有分离和诱导前脂肪细胞的具体步骤吗？我上传一张油红染色的照片吧，成脂的很少，不知是细胞不纯，前脂细胞少，还是诱导方法的问题（我用了3T3的方案），请高手指点。
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发表于 2012-1-18 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有老师观察我这个图片后，说我这个是胶原酶消化过头了，应该调整一下胶原酶的浓度，和终止消化。
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发表于 2012-1-18 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的组织块怎么取的？能不能具体说说。我做的是取幼年小鼠脂肪组织消化法培养，养到一周多时细胞还是梭形的。哪些碎片有可能是细胞死亡后自溶的碎片吧~
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-1-18 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哦，原来是这样嘀，我做的有用胎牛血清中和消化哦
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发表于 2012-1-18 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们是在行外科开腹手术时取的，大网膜脂肪组织。
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伊莎贝拉[使用道具]
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发表于 2012-1-18 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在养原代，也是你这情况，有师姐说是胶原酶失效了，我准备在重新配一个试试。说胶原酶要先用现配。
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发表于 2012-1-18 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在养原代，也是你这情况，有师姐说是胶原酶失效了，我准备在重新配一个试试。说胶原酶要先用现配。
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真的么?胶原酶失效了？可是我们的胶原酶都是现配的啊！
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