色谱爱好者之家

——《不同基质食品中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案》更新之二

一、实验目的
　　以某食用植物油为样品，利用GC/MS和Cleanert PAE固相萃取柱建立对16种邻苯二甲酸酯类化合物的检测方法。


二、仪器及试剂
　　仪器：Agilent7890/5975 GC/MS；离心机；万分之一天平；涡旋混合器；超声仪；氮吹仪；
　　试剂： Cleanert PAE柱为天津博纳艾杰尔科技有限公司产品；16种邻苯二甲酸酯混标（1000ppm）；乙腈（色谱纯）；正己烷（色谱纯）；乙酸乙酯（色谱纯）；
三、实验过程

3.1 样品处理

　　用万分之一天平取0.1g食用植物油，置于玻璃样品瓶中，加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000r/m离心2min，将上清液转移至另一干净样品瓶中，于40℃氮气吹干，加入1mL正己烷，摇匀，作为待净化液。
　　SPE过程如下：
　　（1）活化：用5mL正己烷活化Cleanert PAE柱；
　　（2）上样：将待净化液全部上样；
　　（3）淋洗：10mL乙酸乙酯/正己烷（1:99，v/v）；
　　（4）洗脱：5mL乙酸乙酯/正己烷（1:1，v/v）；
　　将洗脱液于40℃下氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋混合1min，超声1min，4000r/m离心2min，取上清液进GC/MS测定。

3.2 标准曲线绘制

　　将16种邻苯二甲酸酯混标用正己烷稀释成20ppb、50ppb、100 ppb、200 ppb、500 ppb、1ppm、2ppm，用GC/MS进行测定，根据定量离子绘制标准曲线。所选定量离子及各个物质的标准曲线见附录1、附录3。

3.3 GC/MS条件

　　色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm
　　进样口：250℃，不分流进样
　　程序升温：50℃（1min）20℃/min 220℃（1min）5℃/min 280℃（4min）
　　进样量：1μL
　　流速：1 mL/min
　　接口温度：280℃
　　电离方式：EI
　　电离能量：70eV
　　溶剂延迟：7min

四、实验结果

　　4.1 谱图在上述色谱条件下，16种邻苯二甲酸酯类化合物的谱图如图1所示。





图1 16种邻苯二甲酸酯类化合物选择离子色谱图（500ppb）

　　出峰顺序依次为：邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、邻苯二甲酸二戊酯(DPP)、邻苯二甲酸二己酯(DHXP)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、邻苯二甲酸二环己酯(DCHP)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、邻苯二甲酸二壬酯(DNP)

4.2 加标回收率及精密度
　　取5份食用油，在食用油中加入一定量的标准品，按照样品处理方法（3.1）做5份平行样品，回收率及方法精密度见表1。所得色谱图见附录2。
表1 食用油中16种邻苯二甲酸酯类化合物的添加回收率及精密度
峰号 化合物 简称 保留时间 加标浓度100ppb 加标浓度500ppb
平均回收率 RSD(n=5) 平均回收率 RSD(n=5)
1 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 8.315 150.35% 15.19% 165.61% 3.72%
2 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 9.185 141.48% 15.09% 109.62% 2.99%
3 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 10.96 121.48% 8.11% 70.87% 6.94%
4 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 11.723 80.13% 15.75% 91.53% 25.75%
5 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 12.073 111.25% 10.09% 98.52% 5.55%
6 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 12.828 102.90% 8.50% 82.96% 3.85%
7 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 13.167 104.08% 7.08% 95.11% 3.73%
8 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 13.54 92.05% 6.62% 88.51% 4.17%
9 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 15.718 91.04% 5.48% 89.17% 4.95%
10 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 15.875 100.67% 5.69% 97.01% 5.20%
11 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 17.342 89.50% 5.72% 96.64% 5.34%
12 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 18.006 84.37% 6.96% 88.87% 5.52%
13 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 18.243 79.39% 5.31% 80.02% 8.67%
14 邻苯二甲酸二苯酯 — 18.393 70.02% 9.31% 66.12% 3.96%
15 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 20.669 79.56% 7.48% 82.41% 5.88%
16 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 23.24 77.41% 13.90% 74.98% 5.95%

说明：由于邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯是常见的增塑剂，在溶剂中会有些残留，容易在检测时造成它们的回收率和RSD不理想。建议计算时扣除溶剂空白。




附录1
表2 16种邻苯二甲酸酯类化合物定量离子及辅助定量离子



序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 定量离子 辅助定量离子
1 8.315 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 163 77
2 9.185 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 149 177
3 10.96 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 149 223
4 11.723 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 149 223
5 12.073 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 59 149、193
6 12.828 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 149 251
7 13.167 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 45 72
8 13.54 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 149 237
9 15.718 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 149 104、76
10 15.875 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 149 91
11 17.342 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 149 223
12 18.006 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 149 167
13 18.243 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 149 167
14 18.393 邻苯二甲酸二苯酯 — 225 77
15 20.669 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 149 279
16 23.24 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 149 57、71





附录2

食用油样品加标色谱图



图2 食用油中加标色谱图（最后定容浓度为100ppb）




图3 食用油中加标色谱图（最后定容浓度为500ppb）
图2、图3中，样品出峰顺序依次为：邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、邻苯二甲酸二戊酯(DPP)、邻苯二甲酸二己酯(DHXP)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、邻苯二甲酸二环己酯(DCHP)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、邻苯二甲酸二壬酯(DNP)



附录3

16种邻苯二甲酸酯类化合物的标准曲线（20ppb~2ppm）