[讨论帖]如何做好细胞爬片

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标题:[讨论帖]如何做好细胞爬片

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞爬片可以买专门的爬片，几块钱一小包的，爬片用前泡酸，高压消毒（包括镊子和枪头）。把用过的24孔板清洗干净，一孔一片，很方便，又互不干扰。把细胞培养到对数生长期，消化后再滴上去，爬1-2天贴壁后（中间可加适量培养液），可在板子里一直做完。清洗时，将PBS滴在片子上即可，不要剧烈摇晃。需要照相时候，再取出来，细胞面贴在载波片上，最好用50%甘油，中性树脂贴不好，容易毁坏细胞形态。取爬片时候，可以用枪头和镊子，或者用以下战友的方法
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=8879733&sty=1&tpg=1&ppg=2&age=0#8879733')

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2541[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

能不能请教一下免疫组化在细胞上的具体步骤怎么做的啊？

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问细胞爬片到哪里买呀，我在大连

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 shenkunjie 于 2012-2-2 13:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问细胞爬片到哪里买呀，我在大连

中杉公司的有，你具体问下

831226[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是用293t细胞做细胞免疫组化，我们这里叫8-ohDG，我们是在24孔板做的，小片子处理好之后放到孔里，紫外线照1小时，之后就可以铺细胞了，我最大的问题是细胞培养24小时之后，镜下看挺好，但只要一洗细胞就会掉很多，几乎剩下的很少，还有一个问题最后一步染色一般要多长时间，我们有时不到一分钟染色就很重，请帮忙解答一下，谢谢

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

小片子处理好之后放到孔里，紫外线照1小时，
高压消毒后的小片子，不用再照了

细胞培养24小时之后，镜下看挺好，但只要一洗细胞就会掉很多，几乎剩下的很少，
贴壁时间可以延长，洗时候把PBS轻轻滴在片子上，不要摇

一步染色一般要多长时间，我们有时不到一分钟染色就很重，
染色时间镜下观察确定，如果染色就很重，适当降低抗体浓度

04906[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

就是说洗的时候要很轻是吧，那会不会洗不干净呀，你们用什麽固定液，我们用丙酮，是不是固定液也很关键呀，我们固定10分钟

zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主：请教一个问题
实验新手，现在要做癌细胞实验
一般都会选什么方法来做啊？

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是说洗的时候要很轻是吧，那会不会洗不干净呀
不会的,动作要轻柔

你们用什麽固定液，我们用丙酮，是不是固定液也很关键呀，我们固定10分钟

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玻璃片用冷丙酮(-20度)10-15分钟,可以的,如果放在24孔板里做,最好用甲醛,丙酮会腐蚀有机塑料的,

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-2-2 13:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主：请教一个问题
实验新手，现在要做癌细胞实验
一般都会选什么方法来做啊？

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你的实验目的是什么?

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