细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]养过人卵巢颗粒细胞的高手请进来帮忙

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 17  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]养过人卵巢颗粒细胞的高手请进来帮忙

8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
1

发表于 2012-2-2 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]养过人卵巢颗粒细胞的高手请进来帮忙

我想养卵巢的颗粒细胞，需要培养一周左右，因为实验设计是要进行乙肝病毒的感染，但是我养了好几次都没有成功。我不知道我的哪个环节有问题，希望有经验的高手们多抽空指点我。
我的标本来源是经阴道后穹窿穿刺取体外授精的超排卵的卵泡液，（这步我有时候加肝素抗凝有时候不抗凝，不知道需要加不?）拿回实验室，由于在别的医院要的标本，路途比较遥远，坐车要半个小时以上，是要用冰盒低温保存吗？
分离我分了两种方法：一种是1000转离心10分钟后收集沉淀，用hanks液洗后加在ficoll上1000转10分钟，收集中间层细胞。但是这样收集到的细胞很少。再用DMEM+10%小牛血清培养。
第二种不分离，离心后直接培养，通过换液将红细胞去除。这种方法细胞较前一种多。
但是两种方法贴壁的细胞都不多，而且很不均匀，有的地方有一团块，有的地方像很多死细胞。
由于我没做过实验，所以也不知道该怎么办？是不是我的每个环节都有问题？怎么解决？有简单点的办法吗？
还有一个问题就是在培养过程中需要加一些激素不？我养的贴壁细胞越长越长、细到后期根本不像颗粒细胞倒像成纤维细胞。这是没有激素细胞转化了吗？有什么解决办法？我的邮箱 ：jinmoth@gmail.com。有哪些好心的高手们，请进来或者给我发邮件进行指教，本人不胜感激，要不然毕业遥遥无期，每天晚上都睡不好觉啊！
顶部
ffooll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73418
精华 0
积分 437
帖子 574
信誉分 100
可用分 3666
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态 离线
2

发表于 2012-2-2 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
“但是两种方法贴壁的细胞都不多，而且很不均匀，有的地方有一团块，有的地方像很多死细胞。”

你可以在离心前，用胰酶消化一下，成为单个细胞后再进行培养
细胞37度保存都可以，我们这边在水浴锅中保存12小时后再进行培养，效果都挺好的
顶部
duoduo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74511
精华 0
积分 705
帖子 1009
信誉分 100
可用分 5926
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
3

发表于 2012-2-2 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我试着看看，谢谢，你养过吗？用的什么培养基？能交流一下吗？
顶部
ffooll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73418
精华 0
积分 437
帖子 574
信誉分 100
可用分 3666
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态 离线
4

发表于 2012-2-2 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我试着看看，谢谢，你养过吗？用的什么培养基？能交流一下吗？

========================================

我没有养过,不过实验室的其他人养过,用的是DMEM
顶部
969[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74241
精华 0
积分 429
帖子 518
信誉分 100
可用分 3441
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
5

发表于 2012-2-2 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大热天的从别人实验室拿回卵泡液后分离细胞的途中是用冰盒好还是不用好？
顶部
bananapeople[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75315
精华 1
积分 492
帖子 620
信誉分 102
可用分 3964
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
6

发表于 2012-2-2 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近又养了一次，很不成功，细胞不贴壁
养了4天后出现很多奇怪的东西，像水藻样结构，很多，但是照片的文件太大，传不上来，有哪位养过的高手能和我联系一下不？我以电子邮件的形式发到您那里看一下，多谢了。还有不贴壁是怎么回事？
顶部
qhyu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77304
精华 0
积分 705
帖子 1049
信誉分 100
可用分 6111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
7

发表于 2012-2-2 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有人养过颗粒细胞吗？
顶部
windy+++[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74130
精华 0
积分 490
帖子 720
信誉分 100
可用分 4343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
8

发表于 2012-2-2 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近才开始养颗粒细胞，不过不是人的，是其他动物的。我也有用过抽卵液来培养，但是易污染，效果也不好。后面是直接挑卵子来培养，待卵子成熟后用枪头吸吹打下周围的颗粒细胞，把卵子挑出，待打下的颗粒细胞贴壁生长以后再换液或消化到其他瓶皿。刚打下来时，细胞是圆的，但贴壁后，形状长得和成纤维细胞很像。
顶部
Ao7[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76545
精华 1
积分 647
帖子 790
信誉分 102
可用分 4976
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
9

发表于 2012-2-2 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在传了好几代，挺稳定的。细胞贴壁以后，我一直都是用DMEM来养，没有什么问题。
顶部
xue258[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
10

发表于 2012-2-2 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
WXZG，听说颗粒细胞不能传代培养，传代后就不是颗粒细胞了，不知道您对传代后的颗粒细胞有没有做过鉴定。
顶部
 17  1/2 12››