小中大[求助]新手培养Balb/c 3T3细胞的一些疑问
去年9月21日从协和细胞中心拿回了Balb/C 3T3细胞。
拿回来的细胞培养瓶装满了培养液，我用吸管吸出来了，准备后面用。
9月22日1：4传代。一半用自己的培养液养，一半用协和剩余的培养液养。
养了几代后，协和培养液接种的细胞2天就能长满一瓶，而我自己的培养液要4-5天才长满，而且细胞的状态也不太好。想了以下几个原因：
1、换我自己的培养液与协和培养液的配方虽然是一致的，细微的差别可能导致细胞有一段适应期。但是从细胞状态和传代周期长短看来，差别也太大了。不知道问题出在哪？
培养Balb/c 3T3的培养液配方很确定：高糖DMEM，10%FBS，双抗，4mM L-谷氨酰胺。
DMEM: 我用的Hyclone的高糖DMEM，对比了协和细胞中心使用的DMEM的详细配方，只有细微的差别。
FBS: 血清是GIBCO的，没有灭活。
双抗：solarbio的。
谷氨酰胺：sigma的，三蒸水配了过滤。
2、由于是新手，在消化方面一直都做得不好，消化的方法也和细胞中心给的资料不太一样。
协和细胞中心的资料上写的：用胰蛋白酶润洗一次后，用1ml的胰蛋白酶消化。
但我怕这样消化太快了，就听从同事的建议：用PBS洗，然后用的1.5ml的PBS和0.5ml的胰蛋白酶混合液消化5min左右（培养瓶是25cm2的一次性培养瓶），倒掉约1.5ml，剩余0.5ml继续消化几分钟，然后加培养液终止消化，吹打。
我在显微镜下一看到细胞开始收缩就很紧张，怕消化过头，就急着中止消化吹打。有一次由于太多没有吹打下来，还消化了第二次，离心收集的细胞。估计这样对细胞的损伤很大吧，使传代后的细胞长得很慢？
3、培养到4代以后，原来协和细胞中心的培养液用完了，完全用自己的培养液，细胞越长越慢。有的接种细胞太少的培养瓶，有小黑点，细胞之间间隔大，但没有浑浊。
我上丁香园查了一下，自己判断小黑点可能是细胞碎片，说明细胞状态不好，很可能是消化不好或接种细胞太少导致的。也有同事担心我的培养液污染了（细菌或支原体？不太清楚），让我重新买DMEM，灭活血清，新配培养液后再养。
放假前已经把细胞分几批冻存了，复苏过一只，用自己的培养液养，也能养活，但由于过国庆节和担心后期可能已经污染，还没来得及将复苏的传代就收了。准备找一找养的不好的原因，新买DMEM，重新复苏冻存的细胞。
以上是基本情况，请教各位，1、我的培养液有什么问题，为什么细胞状态差别这么大？
2、细胞消化成什么状态，中止消化和吹打最合适？
谢谢！
