小中大谢谢,群友的提醒,确实存在这个问题。所以目前最好的方法还是transwell法。
一般做划痕实验,都是无血清或者低血清(《2%)否则细胞增殖就不能忽略。一般认为细胞周期是24小时,但对于一些特殊的细胞系来说,生长可能会快一点。因此好像还没看见用带血清培养,短时间检测的。不过我会去试试看。可能是个好方法。
划痕法的意义在于,价格低廉,操作简单。还有很重要的一点在于细胞外围环境简单单纯,容易控制。(比如做加药的,可能会和血清的组分有反映,而且受血清批次的影响,造成误差。如果是铺了ECM物质的,组分就更复杂了。)
划痕法的不足也很明显,适用的细胞系很窄,一般只能用于上皮,纤维样细胞系。因为
1。这些细胞本身有迁移能力,且较强。
2。细胞有极性,方便测量,观察。
3。细胞对无血清有较强的忍受力(至少24小时),因此很多肿瘤细胞系是不适合做划痕的,很多肿瘤细胞系在无血清培养下,12小时细胞凋亡就超过50%。这也就是transwell发展的最大要求。而一些上皮样细胞系甚至可以忍受高达72小时的无血清实验。足以弥合划痕。
另:在此贴出的图片都是本人实验数据,非将本人同意不得转载,引用。如需要引用者,请同本人联系协商。
一下是一种上皮样细胞的48小时监测图。可以看到划痕已近弥合。