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帮顶一下,一般刚配好的DMEM培养基在2周内不用加谷氨酰胺,然后每隔两周补加一次谷氨酰胺。
附上我们关于配制并分装100×谷氨酰胺溶液50ml的方法:
1、称取谷氨酰胺1.4600g,加50ml三蒸水,摇动,搅拌溶解使固体充分溶解(约需10-20分钟)
2、吸入干净,干燥的50ml注射器中(挑选注射器时要注意针筒和活塞的匹配,不然太紧,吸入和吹出液体都很费劲,会增加很多麻烦),转入无菌间
3、于超净台内,打开一无菌的100ml血清瓶,无菌操作,取出一滤头,插在注射器张(配制谷氨酰胺专用,不得挪作他用),缓缓将滤过的液体注入血清瓶(约需5-10分钟)
4、取1ml吸管,将谷氨酰胺分装入无菌试管(或1.5ml的EP管)中(每管1ml,可一次全部分装完毕(50管),拿出超净台,封口膜封口,
5、将分装好的谷氨酰胺放入-20度冰箱保存,注意不要将试管或EP管放倒,不要让液体浸到袋子上,最好让其直立,等溶液完全冻结后,再放倒保存。
6、临用前,提前30分钟-1小时将一管(1ml)谷氨酰胺从冰箱取出放于室温化冻,(或者提前1-3小时充-20度取出,放于4度冰箱化冻),待谷氨酰胺全部融化后转入超净台,无菌操作,加入到培养基中,做好标签。
7、配制时不要试图配制更大浓度的谷氨酰胺贮存液,因为此时溶解会有困难。