细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]MTT实验中浓度增加抑制率反而减小等问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 13  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]MTT实验中浓度增加抑制率反而减小等问题

yhz1973[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79832
精华 0
积分 439
帖子 538
信誉分 100
可用分 3540
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
1

发表于 2012-2-7 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]MTT实验中浓度增加抑制率反而减小等问题



1. 用MTT法体外筛选中草药抗癌，经常碰到随着某个药物浓度的增加，抑制率反而减小，有没大侠知道这是啥回事啊？比如药物浓度梯度为6.25， 12.5，25，50，100ug/ml。25 ug/ml时抑制率最高，达到70%，但在50ug/ml时抑制率减为60%，100ug/ml 时抑制率可能还会变小，咋回事？从图片中可以看到细胞在 25，50，100ug/ml这几个浓度都已经皱缩死亡了啊。

2. 还有一个问题，我做的几次MTT中，尽管药物不同，在低浓度时吸光值都比对照组（不加药）变大，这样导致了抑制率在低浓度时是负值。这是为什么啊？不大可能是药物在低浓度促进肿瘤细胞的增长吧！因为很多药物都出现这种情况，药物是用DMSO溶解的。
顶部
yysr238[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79378
精华 0
积分 400
帖子 480
信誉分 100
可用分 3233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
2

发表于 2012-2-7 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加MTT之后离心，离心完去上清的过程，很可能导致孔中的沉淀被弃去，所以结果很有可能不准，我也遇到了，这样的问题。哪位高手给解决下？
顶部
whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态 离线
3

发表于 2012-2-7 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的肿瘤细胞加MTT后不用离心，是贴壁细胞
顶部
caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
4

发表于 2012-2-7 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

高浓度药物组出现镜下细胞凋亡、OD值偏高的现象，原因可能是药物能与MTT起显色反应
溶剂组OD值比加药组要低，不知你所有的加药组和溶剂组所含溶剂是否一致？如果一致的话，建议做一块不加药、不加溶剂的板，看看孔间差异大不大；如果不一致的话，则要考虑是否溶剂影响你的实验结果，有时变质的溶剂对细胞会有毒性作用。
顶部
whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态 离线
5

发表于 2012-2-7 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

高浓度出现细胞凋亡，OD值会比其他孔的小。
但是肿瘤细胞在低浓度药物时反而比不加药物的对照组的肿瘤细胞长得好，导致OD值偏高。理论上应该是对照组的细胞长得最好才是啊。
应该不是溶剂出现的问题，培养基每孔都是一样的。
顶部
pengke1983[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 78619
精华 0
积分 470
帖子 639
信誉分 100
可用分 3986
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-1
状态 离线
6

发表于 2012-2-7 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我这段时间做的抗癌药物也是这种情况，低浓度的药物组比不加药的对照组OD值高，简直就是营养药，很郁闷！盼望早日解决问题
顶部
缘yuan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72882
精华 0
积分 218
帖子 176
信誉分 100
可用分 1626
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
7

发表于 2012-2-7 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个情况我也常遇到
可能是低浓度的时候有刺激生长的作用,"营养药"...
不过浓度很大以后出现小幅上扬应该也算正常吧
MTT还是很粗略的方法
顶部
一叶[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 73286
精华 0
积分 1481
帖子 2541
信誉分 100
可用分 13501
专家分 0
阅读权限 150
注册 2011-9-21
状态 离线
8

发表于 2012-2-7 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
据我的经验, MTT方法还是很不错的方法, 重现性很好.
根据你的描述, MTT结果在高浓度时反而抑制率低, 而在境下观察, 细胞已经"烂掉". 所以如果你相信你的感觉, 应该不会是因为你的药是什么"营养药".

所以, MTT结果应该来源于实验中关键的, 或者是小小的失误. 你不防重复实验一步一步排除.

首先应该确认你的细胞的铺板浓度是否一致, 不防多设两个不加药的孔. 然后药物配制是否正确, 浓度有没有错误. 如果药不贵, 不防在重复实验时重新再配一批. 其次, 加药后DMSO的浓度是否小于1/1000. 药物在各孔加的体积是不是一样. 你的加样方法会不会造成各孔有不同终浓度的DMSO,尤其是会不会在高浓度尤其减小了加药体积而减小了DMSO的终浓度. 再次, 尽管你的是帖壁细胞但在MTT反应后,蓝紫色结晶也是很容易在吸培养基时损失,因为你还要保证培养基吸得完全(估计这一点你不会有,因为这是很容易被发现的). 最后,加入DMSO溶解结晶后混匀是否充分等等.

总之, 遇到问题慢慢排除, 总会发现原因的.
顶部
vvmmoy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79224
精华 0
积分 825
帖子 1270
信誉分 100
可用分 7255
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
9

发表于 2012-2-7 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个情况我也常遇到
可能是低浓度的时候有刺激生长的作用,"营养药"...
不过浓度很大以后出现小幅上扬应该也算正常吧
MTT还是很粗略的方法
================================================
肯定不是‘营养药’的。因为同一批十几种 药都出现这种情况的。
顶部
vvmmoy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79224
精华 0
积分 825
帖子 1270
信誉分 100
可用分 7255
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
10

发表于 2012-2-7 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是药物的抑制率曲线图。


查看积分策略说明
附件
2012-2-7 16:27
26739314.jpg (21.91 KB)
 
顶部
 13  1/2 12››