细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]关于HEP-2细胞接RSV病毒的相关问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 12  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]关于HEP-2细胞接RSV病毒的相关问题

+小生怕怕+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79872
精华 1
积分 306
帖子 225
信誉分 103
可用分 1951
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
1

发表于 2012-2-7 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于HEP-2细胞接RSV病毒的相关问题



我是一个新手，细胞培养和病毒接种也是刚刚接触，用HEP-2细胞接RSV病毒一直没有出现病变，病毒应该是没有问题的，别人有用同种病毒出结果的，想请大家帮我分析一下问题到底出现在哪里。
我的HEP-2细胞用的是10%FBS+1640培养基，呈梭形，但看着比较瘦小，生长速度还是挺快的，但传代时胰酶很不容易消化，而其细胞老抱团生长，都出现叠层了，由于经验不足，想问一下，这些是不是细胞状态不好的表现？
还有，接病毒时可以把病毒和2%FBS的培养液一起加入培养瓶孵育吗？因为病毒量不够铺满整个瓶面，2个小时的孵育时间我害怕细胞干掉，所以加了培养液进去，这样是不是抑制病毒吸附细胞了。问题很多，希望各路高人指点啊。
顶部
+小生怕怕+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79872
精华 1
积分 306
帖子 225
信誉分 103
可用分 1951
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
2

发表于 2012-2-7 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

经过高人指点，再加一点自己的心得体会，与大家分享吧，细胞抱团和不易消化不见得是细胞状态不好的表现，极大地原因是自己操作的失误，这样的情况下，胰酶的量加的稍微多一点，消化时间可以长一点，弃去胰酶后可以在将细胞放置一段时间，这样就很容易消化，将肉眼即可看见的大的细胞团块吸掉弃去，再补足培养液，不会对总的细胞数量有影响，细胞放进温箱时一定要摇匀，不然会长的稠密不均。
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
3

发表于 2012-2-7 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用Hep-2细胞养RSV的时候，细胞的数量不能太多，一般在70%左右就可以接种了，因为本身RSV在开始的24h内有促进细胞增殖作用。接种病毒以后，2h以后的病毒液我并不吸走，而是和新的维持液一起孵育病毒。接病毒开始的1-2天，你会看到细胞数在逐渐增加，到后来的3-5天细胞开始变圆了，并且渐渐的细胞被拉长了，有融合现象，这就是CPE。

Hep-2细胞的体积小，生长速度快，用含EDTA的胰酶消化，消化时间不到三十秒，就可以弃去胰酶，加入培养液吹打，整个瓶壁上的一层细胞，你可以看到的，就会掉下来，我就是这样消化的，镜下基本上都是单细胞，也有细胞团的，但是不多，细胞团也不多，通常四五个聚在一起。但是Hep-2细胞传代时间长了，会发生变异，我发现细胞的形态有所改变了，我不再接着养了，养病毒也不会成功的，我会重新复苏一管新的细胞重新养。
顶部
+小生怕怕+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79872
精华 1
积分 306
帖子 225
信誉分 103
可用分 1951
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
4

发表于 2012-2-7 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢，很感激，很实用，经验之谈文献也查不到。不过我还有不解，我用的胰酶也加的有EDTA，但30秒不行啊，今天消化了三分钟还很难吹打下来。胰酶是0.25%的，T25的培养瓶，胰酶加了将近2mL。
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
5

发表于 2012-2-7 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胰酶消化之前，我先用PBS润洗一下，然后加胰酶消化。胰酶消化很快的，25平方厘米的小瓶加一毫升的胰酶即可，在镜下观察细胞之间出现了缝隙，胞质开始回缩的时候，中止消化，消化都是不到30秒。我怀疑你的胰酶是不是失效了？
顶部
+小生怕怕+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79872
精华 1
积分 306
帖子 225
信誉分 103
可用分 1951
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
6

发表于 2012-2-7 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得不但是胰酶的问题了，可能是细胞传的代数太多了，打算再复苏一瓶了，有什么问题还希望你多多指点，非常感谢哈！
顶部
969[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74241
精华 0
积分 429
帖子 518
信誉分 100
可用分 3441
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
7

发表于 2012-2-7 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问什么是空化现象？？？？？
顶部
ero11[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75131
精华 0
积分 684
帖子 1028
信誉分 100
可用分 5953
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
8

发表于 2012-2-7 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胰酶消化时间是与温度有关的，我们在做实验时一般使用手心给培养瓶加热以提供给胰酶最适活性温度
顶部
+小生怕怕+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79872
精华 1
积分 306
帖子 225
信誉分 103
可用分 1951
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
9

发表于 2012-2-7 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
养细胞已经一段时间了，现在已经不再纠结于胰酶消化的时间和量的问题了，一般我就是加多一点的胰酶放37度温箱，也做过在手心里加热，镜下观察有些细胞脱落变圆的时候，加培养基吹打就行，看到一层细胞被吹下来，感觉很好。我的经验是胰酶消化的时间和细胞的质量、状态还是很有关系的，细胞长的不好，很脆弱的时候，细胞之间分泌物质就会少，消化就不用很长时间。我用细胞养病毒，细胞的状态、敏感性对病毒病变的产生与否有很大关联。
顶部
兔唇[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79677
精华 0
积分 224
帖子 187
信誉分 100
可用分 1676
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
10

发表于 2012-2-7 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

嗯，hep-2还是很好消化和培养的细胞
顶部
 12  1/2 12››