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标题:[求助]PMA刺激U937分化为巨噬细胞如何判定分化完全?

乌贼老弟[使用道具]
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[求助]PMA刺激U937分化为巨噬细胞如何判定分化完全?



刚接触到这个细胞,特来请教。
用PMA刺激U937分化为巨噬细胞需要多大浓度?作用时间大概多长?是不是每次试验都要刺激才能用来试验?还是刺激一次以后就可以传代培养了。

谢谢。
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乌贼老弟[使用道具]
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谢谢,已经搞定。
U937 were obtained from ATCC (American Type Culture Collection,
Manassas, USA). The cells were cultivated in RPMI–1640
cell culture medium (Invitrogen, Karlsruhe, Germany), supplemented
with 10% FCS (PAN Biotech GmbH, Aidenbach, Germany)
and 1% penicillin/streptomycin (Invitrogen) at 37 ◦C at 5% CO2 in
160ml cell culture flasks (Nunc, Wiesbaden, Germany). For differentiation,
the cells were cultivated in 24-well plates (Nunc)
at a density of 5×104 cells/ml/well and stimulated with PMA
(Sigma–Aldrich, Seelze, Germany) at a concentration of 0.1ug/ml
for 2 days (days −2 to day 0).
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乌贼老弟[使用道具]
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再次求助。
我们用了PMA进行分化,但现在试验结果却不理想。
初步怀疑是U937细胞分化不好。想请问大家,用PMA刺激U937分化为
巨噬细胞如何判定分化完全?
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duoduo[使用道具]
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细胞由悬浮细胞变为贴壁细胞,medium中几乎看不见漂浮的细胞应该就可以了。
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细胞由悬浮细胞变为贴壁细胞,medium中几乎看不见漂浮的细胞应该就可以了。

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谢谢你的建议。但我分化了48h仍然有很多悬浮的细胞。分化72h时细胞状态又不好,对试验有影响。不知道大家是用什么试剂进行分化的?看了很多文献,有用VD3和PMA的,现在还是没有搞懂。继续求助高手解疑。谢谢
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TAT[使用道具]
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TPA就是PMA,是相同的。
我们用160nM PMA,加入到U937中培养基中,24h后所有的悬浮细胞都可以贴壁,即转化成巨噬细胞。没有出现不贴壁的现象!
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vera+[使用道具]
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你的PMA会不会保存的不好或者时间长了,效价降低了?导致刺激效果不好
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乌贼老弟[使用道具]
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PMA用DMSO溶解成1mg/ml,然后用PBS稀释成1微克/ml冻存于-20度,用前室温解冻,不知道这样有没有问题?(试剂没有超过一个月。)
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zhezhe[使用道具]
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PMA一定要避光保存,一般分装为5ul,10-2M每管,用完即扔,切记避光。否则失去效果。我在国外实验室都是这样用,从无问题。
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爱老虎游tt[使用道具]
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想请问一下,U937如果不分化,直接用LPS刺激,能出现炎症反应吗?
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