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标题:[讨论帖]原代细胞培养交流

一叶[使用道具]
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发表于 2012-2-8 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[讨论帖]原代细胞培养交流





搞原代细胞培养,我看到大多数都是传代培养细胞,我想能不能有个专门的原代细胞培养交流区,可以把自己的原代细胞培养经验和大家交流..因为原代细胞培养花费了我和师兄好几乎一年的时间.原代培养是个很费时间和精力的过程,希望这样可以使很多人能够少走弯路,节约时间.我想这会更有意义.我培养的是支持细胞,现在可以说方法基本上已经成熟,有需要这方面资料的群友可以互相交流.
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any333[使用道具]
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发表于 2012-2-8 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是 做原代细胞培养的，非常希望看到这方面的资料和经验，做了一阵子，自己的摸索还有看资料，有了一点感觉，但还是不熟练，并且不稳定。有没有做动物细胞原代培养的阿，大家来交流一下！
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发表于 2012-2-8 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

积极跟帖。
我培养的是脐动脉平滑肌细胞，用贴块法。
1.要用胎牛血清。开始用的是小牛血清，所以总是不成功，培养基换为DMEM/F12,但后来我又换成DMEM，也培养出来了。－所以作实验特别是新手，刚开始还真得不怕花钱，否则，费时又费力。
2.把脐动脉剪开很麻烦，因为它老是打弯，三木提示可以找个软木塞，用大头针固定，后来我找了块木板，因为有磨擦力，所以动脉可以固定在板上。
3.对于新手来讲，最麻烦的就是把组织快剪成1mm3小块，可以找块磨砂玻璃，切完再剪就好多了。
4.把剪碎的组织快移到培养瓶里，我用了类似牙科的刮匙，直接放进瓶里。加入2ml培养液，一定不能放多，防止漂浮。然后用玻璃分针轻轻将小块分离开。
其他的基本就按文献就可以了，比如，三个小时后翻瓶，换液时保留1/3。
不过，我的细胞总是到2个星期后才开始生长，快一个月了才长满瓶。刚开始长得特别慢，后来就快多了，传完代后就长得更快了。
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发表于 2012-2-8 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我培养的是小鼠的肝细胞,正在摸索阶段,养了两次,用的是组织块法,还有就是过筛网分离成单个细胞接种,都没成功.
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-2-8 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位同仁:
请教个问题,我在培养平滑肌细胞中,出现了很多的成纤维细胞,请问有什么好的办法可以分离出它们呀
多谢了-----------------
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-2-8 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位同仁:
请教个问题,我在培养平滑肌细胞中,出现了很多的成纤维细胞,请问有什么好的办法可以分离出它们呀

求助___培养平滑肌细胞中,出现了很多的成纤维细胞,请问有什么好的办法可以分离出它们???
有人说.用胰酶消化以后,两种细胞贴壁有快慢:成纤维细胞贴壁快,平滑肌细胞贴壁慢,靠掌握时间将它们分离开.
上面的说法是否正确,那么消化后,(细胞贴壁过程中)该在多少小时以后将悬浮液转移,另外培养,才能得到比较纯的平滑肌细胞???
谢----不吝赐教!
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发表于 2012-2-8 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养心肌细胞，大鼠乳鼠的，应用差速贴璧法并未取得较好的效果。
因为成纤维细胞的存在可以支持和营养心肌细胞。所以差速贴璧后心肌细胞长得没有混合培养好，不知各位同仁战士意见如何，怎样才能有效地纯化心肌细胞呢？
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发表于 2012-2-8 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位同仁:
请教个问题,我在培养平滑肌细胞中,出现了很多的成纤维细胞,请问有什么好的办法可以分离出它们呀

求助___培养平滑肌细胞中,出现了很多的成纤维细胞,请问有什么好的办法可以分离出它们???
有人说.用胰酶消化以后,两种细胞贴壁有快慢:成纤维细胞贴壁快,平滑肌细胞贴壁慢,靠掌握时间将它们分离开.
上面的说法是否正确,那么消化后,(细胞贴壁过程中)该在多少小时以后将悬浮液转移,另外培养,才能得到比较纯的平滑肌细胞???
谢----不吝赐教!

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两个方法：1.成纤维细胞消化快，所以可以先用胰酶消化掉。加胰酶重新消化平滑肌细胞分瓶装。
2.成纤维细胞贴壁快，所以，消化后1个小时左右将培养液倒入另一个培养瓶中进行平滑肌细胞贴壁。
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发表于 2012-2-8 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有没有哪位高人做过小鸡的神经细胞原代培养的？交流请教一下吧。我是一只菜鸟。
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-2-8 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我正准备瘢痕疙瘩成纤维细胞的原代培养，请各位大侠提供一些这方面的宝贵经验。如果培养成功，在传代的细胞里加酸性的水煎醇提的中药能行吗？在下这厢有礼了。
谢谢了,我将照你的方法好好做做,过段时间告诉你结果
真的谢谢了,帮我大忙
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