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标题:[求助]培养过SH-SY5Y的群友切磋一下!

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发表于 2012-2-9 12:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]培养过SH-SY5Y的群友切磋一下!



如上.我是第一次培养SH-SY5Y细胞株,不知道这种细胞株的最佳培养、转染条件是什么？曾经或正在培养该细胞株的战友，不妨谈谈体会。
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-2-9 12:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最佳培养条件ATCC上不是写了吗?我用的是DMEM/F12+10%的FBS,但不知道是不是冻存时细胞状态不好,现在情况不妙.
你的细胞是别人送的还是买的?若是买的能告诉我你在哪儿买的吗?谢谢!
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2012-2-9 12:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我买的是中国协和医科大学基础医学院的细胞株，花了RMB大概是600吧！请多指教！
协和细胞库。 联系电话： 65296455 65286441 65212041

中国医学科学院基础医学研究所
中国协和医科大学基础医学院
SH-SY5Y 人骨髓神经母细胞瘤 有卖！祝好运！^_^
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-2-9 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

支持，我也要转染这种细胞，听说很难转，不知道有什么经验？

我用DMEM+10％FBS养，也很好的，感觉细胞不难养。
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发表于 2012-2-9 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我还没转呢！估计还要摸条件。文献上也说这种细胞比较难转，尽力吧
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-2-9 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
支持，我也要转染这种细胞，听说很难转，不知道有什么经验？

我用DMEM+10％FBS养，也很好的，感觉细胞不难养。

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你用的DMEM是高糖还是低糖啊?
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发表于 2012-2-9 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

目前，我用的培养基是协和基础医学院提供的，是R1640，DMEM我没有用！不过最近不知道怎么回事，细胞死了不少，郁闷ing！
我也是邮购的细胞株，周期大概1个礼拜。
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2012-2-9 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
支持，我也要转染这种细胞，听说很难转，不知道有什么经验？

我用DMEM+10％FBS养，也很好的，感觉细胞不难养。

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你用的dmem是高糖还是低糖的？谷氨酰胺要不要加，多大浓度的？传代是怎么处理的？
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04906[使用道具]
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发表于 2012-2-9 12:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
高糖的吧，就是我们最常用的那种，等晚上我再给你确认一下。
谷氨酰氨不用加。
我也是从协和买的，感觉没什么不好养的。
不过想起来刚买来的时候，确实不太好弄，你也是刚买不久的细胞吧，养养就会觉得很好养的。刚开始买来的时候也是有好多死细胞，我还曾经将血清提高到15％养，现在看来没有必要。我想是不是你传代传得不好？消化不要过头，我一般37度2分钟。我曾经将这种细胞给别人，他消化过头细胞就没养起来。
协和好像是用1640养的，但是我看文献用DMEM养的也很多，所以我就用DMEM养，觉得挺好的。
我觉得你目前不要过分担心，刚买来的细胞死一些也没关系；
细胞传代后生长比较慢，是神经元的特性，不要着急；
隔天换液，让细胞处于好的营养条件下；
传代不要消化过头。

有问题再探讨。
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-2-9 12:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问题是细胞形态很差,而且贴壁的很少(ATCC上说是混合型的,但我看见的大多是悬浮的),培养基等了一个星期颜色都没变浅.
你们有形态较好时的照片吗,能否传上来瞧瞧?
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