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标题:[求助]about tube formation assay

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-2-10 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]about tube formation assay




请问哪位高手作过tube formation实验？我最近在做，但是我的HUVEC怎么长不出管腔呢？我是将Matrigel稀释一倍，铺在96孔板底部，待胶充分凝固后加入细胞悬液浓度40000个/ml每孔加50ul,100ul,200ul（不同体积是为了选择最佳条件）从６小时开始观察一直都没有看见小管形成。请问问题出现在哪里？请高手指导，谢谢！！切盼回复。
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发表于 2012-2-10 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能出现问题的地方很多。
1 最基本的问题:血管内皮细胞状态不好，甚至不是血管内皮细胞;
2 培养时间不够，细胞密度过低;
3 选用基质:您用的Matrigel我没用过，无法提什么建议; 我用的是1型胶原，效果很好。
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发表于 2012-2-10 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

附几张片子供参考:


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 小中大

ｐｉｃ 2


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发表于 2012-2-10 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
pic 3 ~~~~~


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发表于 2012-2-10 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们一致认为是我们的HUVEC出了问题，但是还没有充分证据说明。我们的培养时间已经很长了，观察了24小时以上，甚至留样到72小时，只能看到分散的球状细胞。细胞密度应该不会低，我们用的是96孔板。不知你用的细胞密度是多少？请指教，谢谢！
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发表于 2012-2-10 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是6孔板。很早以前的工作了，细胞密度记不得了。不过细胞密度很大，24h后接近100%。你的密度还是偏低的（个人观点，hoho）
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发表于 2012-2-10 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
「分散的球状细胞」?HUVEC不是这个样子的呀。把你的照片发上来看看吧。
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发表于 2012-2-10 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请看看我的实验图片，开始的图片是不对的。请给点意见，谢谢。


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 小中大
再看看


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