细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]关于结晶紫染液的配制--By G

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 15  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]关于结晶紫染液的配制--By G

ha111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72969
精华 0
积分 821
帖子 1239
信誉分 101
可用分 7048
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
1

发表于 2012-2-10 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于结晶紫染液的配制--By G



看到文献中提到结晶紫是0.05%的结晶紫溶在10％的甲醇中，在论坛上又查到的是溶在无水乙醇中。不知有谁知道这其中有什么讲究吗？
顶部
yychen[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77452
精华 0
积分 516
帖子 751
信誉分 100
可用分 4495
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
2

发表于 2012-2-10 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关注参考此贴：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1845824&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#1845824')
顶部
ladyhuahua[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76658
精华 0
积分 984
帖子 1667
信誉分 100
可用分 9116
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-8
状态 离线
3

发表于 2012-2-10 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

结晶紫的染色用途：
1）组织中作细菌染色；
2）与茜素红作线粒体颗粒染色；
3）用于纤维素及神经胶质、类淀粉染色
4）属于核染色剂（碱性），活体染色剂。
配制结晶紫浓度文献上提的0.1%好像多一点的（我查到的），有在ddH2O或PBS里配的，也有在甲醇或乙醇里配的，在后二者中，结晶紫易于溶解，甲醇和乙醇都可以固定细胞用，二者无多大的区别（如果在ddH2O或PBS中，应该先用4%PFA固定细胞）。
我老板以前美国实验室寄过来一份方案，结晶紫是用纯的甲醇（或乙醇）配成0.5%浓度（母液），用之前以1（母液）：4.5（生理盐水）再配成染液（配好后避光可以存放24小时）。如果不稀释的话，你可要当心你的96孔板上漫出来！
楼上的链接贴是我发的求助贴，我不知道有没有说话的力量，你就仅供参考吧！因为现在我的细胞染色结果老板认为不理想，我正考虑是不是用MTT来做！
顶部
guagua[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72040
精华 2
积分 732
帖子 1016
信誉分 104
可用分 5955
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-3
状态 离线
4

发表于 2012-2-10 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看了你们的帖子了，我也感觉染色的深浅并不重要。可以用10％的醋酸提取细胞里的染料，在560nm测OD值，以此来反映黏附的细胞数量。谢谢你提供的配制方案！By the way,这母液能保存多少时间，也要避光吗？
顶部
caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
5

发表于 2012-2-10 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
on your bench ?do u mean it needn't avoid light?thank u!
顶部
is2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75851
精华 0
积分 510
帖子 680
信誉分 100
可用分 4233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
6

发表于 2012-2-10 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那是不是储存液还得避光？无需冷藏吧？我要做transwell，用于染侵袭过matrigel的细胞。想先用甲醇固定，再用结晶紫染色。如果我用甲醇配结晶紫，那是不是可以固定染色一步完成？时间怎样控制？
顶部
66+77[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75637
精华 1
积分 596
帖子 785
信誉分 103
可用分 4751
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
7

发表于 2012-2-10 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

染液配好后避光放置5个月以后使用才是最好的，越久的愈好然出来的片子颜色才最好。来不及就买吧。
顶部
831226[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79782
精华 0
积分 770
帖子 1240
信誉分 100
可用分 6976
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
8

发表于 2012-2-10 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PBS 中固定和染色都很简单，固定20分钟，染色5-10分钟就可以。我没有做过MATRIGEL，不知道在MATRIGEL里染色后你怎么把BACKGROUND去掉？OTHERWISE 黑乎乎你怎么COUNT细胞啊？
顶部
is2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75851
精华 0
积分 510
帖子 680
信誉分 100
可用分 4233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
9

发表于 2012-2-10 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
transwell不是有层膜吗？我要测的是侵袭到膜下面的细胞。我先固定染色，再把膜上面的matrigel连同没侵袭过去的cell用棉签擦干净，这样背景就清楚了。不知liubaoyin 说的“来不及就买”是什么意思？买现成的配好的？我已经买了固体的，还想明天配，后天用呢。希望效果不会太差！God bless me!
顶部
orangecake[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77305
精华 0
积分 512
帖子 724
信誉分 100
可用分 4431
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
10

发表于 2012-2-10 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用过TRANSWELL么? 我在另一个贴子中提到过TRANSWELL做ASSAY时的人为因素很大,不知道你的意见如何?
我遇到的问题有: 1.如果你的细胞不很"粘",那么它的特异性迁移(对着某个化学信号梯度,通常是在TRANSWELL底部加血清或某种信号来造成方向性信号梯度)与它的随机性迁移的差距就很难区分开(我个人认为TRANSWELL检测时ASSAY组和对照组的差距在50%以上才有意义); 可一旦你用的细胞很"粘",往往迁移后细胞会在TRANSWELL的INSERT的外底部聚集,然后部分就掉到下面去了.掉下去的还好说,收集COUNT就可以了,可"爬"过去又"粘在"底部的细胞往往不是很匀的一层, 堆了好几层, 你根本无法直接COUNT.即使用胰酶反复处理后再收集到一起,都会由于操作繁琐而造成数据重复性极差! 2. 用TRANSWELL做ASSAY时, 一般地说, 在INSERT上加入的细胞量是下面能够"爬"过膜的细胞量的50-100倍, 就是说, 你上面加了一个MILLION的细胞, 最后你下面能有一两万个就很好了.因此控制上面的量就非常重要, 但往往操作起来非常困难.
(希望你的实验成功, 带给我一些惊喜!)
顶部
 15  1/2 12››