小中大[讨论帖]黑胶虫真的存在吗？请用严谨的态度对待之
黑胶虫到底是否真的存在呢？这是困扰许多细胞实验者的一个重要的问题。近期我们的细胞实验也出现了一些问题，使我对于黑胶虫的态度，从嗤之以鼻，到怀疑，到相信，在此我把自己观察到的一些现象和自己的一些分析和大家分享，希望前辈们能给予指导，也希望对大家的实验有所帮助。
本人从去年5月开始养细胞（鼻咽癌的CNE1和CNE2细胞株），开始使用的是四季青的胎牛血清，一直养的很好，细胞状态非常好，细胞生长很快，也顺利完成了一部分的实验。但因为某些数据不理想，我从其他实验室交流来了另外一株CNE2细胞，因为该细胞一直用进口Hyclone血清培养，所以我培养该细胞时使用了我们医院其他实验室提供的进口Hyclone血清（条件严格遵照该实验室提供的方法），拿来的时候细胞状态非常好，但培养一段时间后状态开始变差，特别是冻存复苏的细胞状态更差，而且更严重的是自从那次开始，在我们实验室养的所有细胞状态都变得不好，即使后来我们复苏了最初状态很好的冻存细胞也出现同样情况，表现在：
1. 细胞生长速度减慢，严重时甚至停止生长。
2. 细胞有向间质细胞形态转变的倾向，细胞突起增多，甚至伸出长的类似神经轴突样触角，或细胞梭形改变。
3. 除部分细胞出现上述形态改变外，其余大部分细胞面积变大（注意不是体积），立体感变差，细胞排列疏松，胞核距离增大（注意不是细胞间距离），边缘呈皱褶样，感觉整个细胞变扁软瘫在培养瓶底。
4. 仔细观察，形态出现间质细胞转变的细胞似乎对致病因素的耐受性更强，体积变大的细胞死亡比例更高，继续培养大部分细胞变成多突起或梭形细胞。
5. 细胞对各种处理因素的敏感性增强，细胞容易死亡，平板克隆形成实验在空白组的克隆形成率大约只有正常的1/3—1/2，而且克隆小，松散。
6. 400倍显微镜下观察，细胞胞浆内可见多个折光性强的颗粒，类圆形或短杆样，部分融合成团，细胞周围也可见数个类似的颗粒呈类似布朗运动的扭动。
7. 连续传代，可筛选出部分耐受性较强的细胞，形态相对正常，增殖速度相对正常，但仍不稳定，可能于某次传代后细胞形态再次改变。
一同实验的同学认为这是黑胶虫污染，我也查了一些资料（可能当时查得不够详细），当时我觉得黑胶虫这东西是不可能存在的，原因有下：
1. 黑胶虫如果是一种微生物，而且可以用显微镜观察，那么一定可以被微生物学家证实。
2. 有观点说黑胶虫只感染状态不好的细胞，对状态好的细胞影响不大。当时我觉得这个完全是细胞没养好的借口，细胞状态好就什么事没有，细胞状态已经不好了，还怪罪于要黑胶虫，那对黑胶虫是不公平的。
3. 细胞内出现折光性颗粒应该是细胞状态不好代谢产物的堆积，细胞周围漂浮的颗粒应该是细胞碎片或者释出的包涵体。
4. 有太多的实验朋友把细胞状态不好归咎于黑胶虫污染，但又拿不出证据，甚至有些朋友每看到细胞周围有黑色颗粒就认为是黑胶虫污染。
虽然原因不明，但我们还是对实验室使用的物品全部高温高压消毒，培养基和试剂也全部换新的，但类似现象仍持续发生，甚至我从别的实验室观察到状态很好的细胞，拿到我们实验室培养，大约3-5代就逐渐出现上述情况。如此反复消毒，再培养仍是。
