[求助]实在是不知道怎么回事，sy-sy5y培养瓶中的怪事

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标题:[求助]实在是不知道怎么回事，sy-sy5y培养瓶中的怪事

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发表于 2012-2-11 11:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养的是神经母细胞瘤（sh-sy5y）,本来长得好好的，正准备做实验，结果发现细胞老是脱落，还是一快一块的飘起来，我刚开始以为是太满了，传代，换液。结果发现一旦出现细胞形态不好，有大块飘起来，那么整瓶细胞便会很快的死掉。
最后发现整瓶细胞长满了小颗粒，20倍镜下观察如下图，不知这是怎么回事，也许是因为长满了这种东东，sh-sy5y便无法贴壁了。
各位大虾，一定要帮帮忙阿！课题全靠sh-sy5y了

附件

2012-2-11 11:04

19439689.snap.jpg (64.02 KB)

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发表于 2012-2-11 11:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

满视野的就是“怪物”，少得可怜的一团一团的便是我养的牺牲的sh-sy5y谁能来救救它阿，曾经辉煌一时，如今却败在这不知名的小怪物上，不甘啊！！

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发表于 2012-2-11 11:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这种东东怀疑是一种生物，会不断地生长增殖，速度很快。一天时间培基的颜色就变黄了，养细胞都没这么消耗快！
紧紧贴壁生长，yong胰酶可以将它消化下来。

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发表于 2012-2-11 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

现在我还有几瓶长得还可以，但是也有这种小颗粒。不知道能不能接种96孔板将实验作下去，还有这样的细胞做rt-pcr会不会对结果有影响！

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发表于 2012-2-11 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

今天我又扔掉了几瓶，但心里实在纳闷：到底是什么东西呢？
我会从哪里感染上，我同批配的培基别的人也用着在养细胞还可以。

131415[使用道具]
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发表于 2012-2-11 11:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是养的这种细胞，可是从来没有出现过这种问题，你的培养液除了变黄，还有混浊吗？不知道你说的小颗粒是图上的哪个东西，是小黑点吗？看

起来好像是感染了什么生物。

另外你用的是什么培养液？

无菌操作很严格吗？

owanaka[使用道具]
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发表于 2012-2-11 11:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果培养基很快变黄，应该考虑是否有支原体污染，这些小东西也许就是死亡细胞的碎片，只是猜测，建议你加些抗支原体的药试试。
good luck!

兔唇[使用道具]
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发表于 2012-2-11 11:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养的sy5y培养基颜色变的也很快，但是没有污染，好像这个细胞消耗培养基是挺快的，此外，sy5y一个mixture,含有贴壁细胞和悬浮细胞，这个你在atcc的网站上就可以查到，建议你重新配培养基再复苏一管，传代的时候离心洗一下，这样细胞就不会成团，因为这种细胞本来就容易形成cluster，在atcc网站上看看先

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发表于 2012-2-11 11:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先谢谢大家的帮助，我所指的是图中的亮圆点，途中的细胞已经成固缩状了，没有贴壁的细胞！
在此我想请教一下yhz1975和忆秋两位，你们养的sh-sy5y怎么样，几天能传一次代？用的什么培基？
我养了两个月了，可状态不是太好，实验所需的试剂盒都订了，pcr的条件也摸好了，就是细胞迟迟养不好，还没有正式开始做实验，真是急啊！

兔唇[使用道具]
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发表于 2012-2-11 11:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用MEM-F12培养基。MEM和F12按1：1的比例加，15%FBS。4-5天传代一次，中间可换一次培养基，因为它消耗营养挺快的。

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