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标题:[分享帖]含软脂酸的细胞培养液如何配制

一叶[使用道具]
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发表于 2012-2-11 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[分享帖]含软脂酸的细胞培养液如何配制



本人想用含软脂酸的细胞培养液处理细胞以观察软脂酸对细胞的影响，但软脂酸是不溶于水的，查了一些文献但说的都不够清楚，想请教一下曾配制过这种培养液的朋友。谢谢
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leifengta[使用道具]
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发表于 2012-2-11 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是游离脂肪酸，一般浓度都不会很高，大部分是umol/L。配制前，现用乙醇或石油醚溶解一定质量的脂肪酸，装进一个干净的瓶子中。氮气吹干，然后用0.15M KOH溶解。即可以使用。如果你需要使用BSA，则事先和溶解于PBS中定量的BSA溶液按比例混合。
祝实验顺利！
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dog002[使用道具]
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发表于 2012-2-11 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是的我想用的浓度是250umol/L 、500umol/L,也有可能用2mmol/L。请问为什么要用氮气吹干呢，用超净工作台上的风把它吹干行吗，先将其溶解又将其吹干的道理是什么？
我的确是要用BSA，您说“如果需要使用BSA，则事先和溶解于PBS中定量的BSA溶液按比例混合”，这个事先是什么意思？是不是说在用乙醇之前，另外乙醇的浓度是用多大的？还有按比例混合是按多大的比例呢。linliangsong这位朋友能给详细解释一下吗？
我还看到一些文献上说用蛋白吸附的机理来溶解游离脂肪酸，请问是否就是您告诉我的这个办法呢？
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一叶[使用道具]
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发表于 2012-2-11 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哈哈，这个问题困惑了我好久，因为我的实验也是在培养基中加入脂肪酸。为此问题专门阅读了大量的文献。发现，国外几乎普遍的做法都是上面我向你介绍的那种。因为我的脂肪酸特别少，只买了几十毫克，根本没有办法用天平称量，所以就全部拿来配溶液。首先是用乙醇溶解试剂瓶中那点几乎肉眼看不到的脂肪酸，然后将其全部转移到一个具塞小试剂瓶中。氮气吹干，用0.15M KOH溶液溶解。我用的是fatty acie free BSA组分V。文献中一般说明脂肪酸和BSA的摩尔比4：1。所以将定量溶解于PBS中的BSA与脂肪酸溶液按照这个比例原则进行混合，制成高浓度的母液。然后再按照试验要求，添加到培养基中。其中氮气吹干在一定程度上起到保护的作用。
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dog002[使用道具]
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发表于 2012-2-11 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢这位朋友，我算是问对了人。我还想请问你一下你的FFA 和fatty acie free BSA是从哪里买的，我查了许多国内外文献几乎都是在SIBMA公司买的，而我在SIGMA公司的产品目录上看到最小的包装也是10g,而你知道我们做细胞培养只需要配umol/L数量级的浓度，所需量很少。非常感谢这位朋友，我非常盼望你的回答。
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一叶[使用道具]
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发表于 2012-2-11 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #5 dog002 的帖子

BSA是在罗氏买的，价格比sigma便宜，也是10g的包装。游离脂肪酸就是在sigma买的。
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flower-201[使用道具]
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发表于 2012-2-11 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的课题也是有关这方面的呀! 从去年开始软脂酸的溶解性问题一直困挠着我.总是溶不了细胞培养液!郁闷啊!
我的方法是:先用无水乙醇溶解,配成高浓度,放4度保存!然后再按照试验要求，添加到培养基中.混匀!但是发现几个小时后还是不溶,全部浮在培养液上.不知道是什么原因???是方法不对吗?
还有你说的方法中为什么要加BSA?是不是只有加了BSA才溶?期待你的回答!谢谢!
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一叶[使用道具]
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发表于 2012-2-11 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加BSA的原因是由于正常培养时的培养基里面是有血清的，但是作脂肪酸代谢方面研究必须进行无血清培养，为了模拟一些类似的条件，不至于造成太大的细胞毒性，因此一般添加BSA。因为其他的脂肪酸对你需要研究的这种来说可能存在干扰，所以就选用fatty acid free BSA。
至于你说不溶解的问题，有的文献上是说直接用乙醇溶解后添加到培养基中，但是几乎都是国内的文献。我查到的国外的文献几乎都是用氢氧化钾溶液溶解，然后按照一定的比例溶解到一定浓度的BSA的PBS溶液中。使用时，按照所需要添加的脂肪酸浓度，添加到普通培养基中。一些韩国的更是厉害，要添加什么硒等等，似乎是模拟无血清培养基，还有一些就干脆使用无血清培养基。
你所用的脂肪酸浓度是多少，是不是浓度太高，所以不溶解。另外，你用的是游离的软脂酸还是甲酯，不可能是甘油三酯吧？软脂酸作为饱和脂肪酸，熔点本来就比较高。其实应该没有什么必要放在低温下，因为它是饱和脂肪酸，还是比较稳定的。
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dog002[使用道具]
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发表于 2012-2-11 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我还想问，您在3月2号的回帖中说只买了几十毫克脂肪酸，我还是想问一下您在SIGMA买的这个脂肪酸真有这么小包装的吗，您能否给我一个这个试剂的目录号，我为什么在SIGMA公司找不到这么小包装的脂肪酸呢，我太需要您的尽快回答了，因为我得马上定试剂，10g和几十毫克价钱是相当悬殊的。盼回音
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一叶[使用道具]
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发表于 2012-2-11 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我买的是亚油酸、EPA、DHA等多不饱和脂肪酸，主要是在两家公司买的，一个是sigma，还有就是Matreya。最大的包装也就是1g。matreya的大部分都是买了25mg。你说的可能不是细胞培养级别的，或者纯度不是很高。也有可能是软脂酸比较好生产，所以都是大包装。不过我看了一下价格，也不是很贵。10g才用20多美金，你要知道我的25mg还花掉了近70美金。你不妨多看看几个公司，其实也不一定非要用sigma的。ICN的也不错。
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