小中大该改良方法的特点如上表所示:1)用材简便、价格低廉。载玻片、tips、中性树胶都是实验室常用的耗材,不需要购买相应的24孔板或6孔板,同时也不需要购买专用的细胞爬片。同时耗费的培养基和细胞都要比传统爬片方法要节省的多。2)爬片效果更好。实验中我们发现盖玻片爬片时,周边爬片效果良好,而中间位置容易出现不明原因的严重脱片现象,甚至出现盖玻片两面都贴上细胞的情况。改良后,细胞分布均匀,没有明显的脱片情况。3)操作简便。细胞在载玻片爬片最大的优点就是能够大批量的进行染色,如同普通石蜡切片一样。有研究人员用明胶[50]或者玻璃胶[51]将盖玻片爬片粘到载玻片上进行染色,或用琼脂糖包埋后进行石蜡包埋[52]后切片染色,这些都是变盖玻片爬片为载玻片爬片的方法,有利于后续染色的简便。传统爬片需要裁切与孔板相适宜的盖玻片或购买专用细胞爬片,在取出爬片时,经常会损坏爬片。在透明过程中,如果不取出爬片,二甲苯则会溶解孔板。项晓人等[53]研究的大批量培养细胞爬片的染色方法的简易装置仍是针对传统的细胞爬片,使用橡胶管固定爬片,会出现在二甲苯中胶管容易老化的现象。程光等[54]的细胞爬片病理处理湿盒装置和李宏等[55] 高密度阵列式细胞爬片培养装置、贮存装置及实验装置,也都是针对细胞爬片中的繁琐过程设计的,但存在现尚未市场化和比该方法造价高的问题。5)改良的爬片方法与传统爬片方法一样,可以进行连续培养,并可进行诱导或加药。因为筒管与载玻片之间用中性树胶粘贴,比较容易出现粘贴不牢的情况,连续培养应在7天之内,这是不如传统爬片的地方。尽管使用中性树胶作为粘贴剂,对细胞可能存在潜在毒性,如果短期培养则不受影响。
总之,我们认为,对短期(七天以内)的细胞爬片,改良方法较传统爬片方法具有用材简单、价格低廉、爬片效果好、操作方便等优点。
50.郑海燕,惠京.一种培养细胞免疫组织化学染色方法的建立[J].天津医科大学学报,2001,3(7)418-419.
51.尚宏伟,王兴翠,张立新.一种培养细胞免疫组织化学染色方法[J].首都医科大学学报.2005,27(5)695-696.
52.郑晖,肖德胜,蒋海鹰.培养细胞免疫组化方法的改进[J].细胞生物学杂志.2003,25(1):63-64.
53.项晓人,姜海英,赵喜新等.大批量培养细胞爬片染色的简易装置[J].解剖学研究,2002,24(4):312.
54.程光,张赟,章翔等.一种细胞爬片病理处理湿盒装置[P].中国.物理.200520078836.X.2006.11.08
55.李 宏,刘 佳,孔庆友等.高密度阵列式细胞爬片培养装置、贮存装置及实验装置[P].中国. 200610047607.0.2007.03.14
华北煤炭医学院中心实验室所培养细胞用此法爬片:Eca109食管癌细胞株在培养箱中孵育24h及48h;HK-2肾小管上皮细胞株分别孵育48h、72h及96h;SHG-44脑胶质瘤细胞孵育96小时;脐带血间充质干细胞和骨髓间充质干细胞分别孵育24h,均未发现细胞污染和增殖受限,细胞状态良好,细胞直接爬片于载玻片,未有明显脱片现象。
该方法已写成论文,被《中国应用生理学》收录,预计明年发表。