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因为没有用过I型胶原蛋白 所以不是很清楚它的使用方法
但是使用筛网去除周细胞和星形胶质细胞 我个人感觉效果不明显 原来我们也曾经使用过用筛网 纯化的方法 ，但是效果不好 ，后来用机械刮除 ，也不能较大程度的除去杂细胞。最后还是用了现在的两次酶消化法。
另外 ，我觉得其实原代最关键的是剥除脑膜这一步，这一步做好了，细胞几乎不用纯化方法也会长的很好。这就要看你的手法了 ，尽量把脑膜剥干净吧。
培养基的话 我们用的高糖DMEM+20%FBS（进口HYCLONE胎牛血清)+1%双抗+1%L-谷氨酰胺+3%ECGF(终浓度好像是300ng/mi)+1%肝素（终浓度1mg/ml)
生长因子一般都没有现货，到货周期2-4周，需要提前订货。
原代用的是2-4周的大鼠，再大一点也可以，但是颅骨会长的比较硬，取材的时候很不方便，所以我们一般都用的3、4周的，一次原代用4-6只鼠，低于四只得到的血管段很少。操作时尽量温和，可以得到较大的血管段。
以上这些都是我们用两次酶消化法做BMEC的一点经验，不知道是否同样适用于你的方法，希望对你有用吧
