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标题:[求助]LDH检测细胞活性

兔唇[使用道具]
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[求助]LDH检测细胞活性



我想用LDH 试剂盒检测药物对神经元 的毒性作用和诱导凋亡结果,请问哪位做过这种实验,用哪里的试剂盒,上清液和细胞是不是都要分别做。重复性怎么样?
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glass[使用道具]
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没做过神经元的LDH测定.不过做其它细胞时用过南京建成生物工程研究所的盒子,仅供参考.
一般的试剂盒内的说明都比较详细,但主要是测生物样本(血浆\均浆等)的,如测细胞还需要自己摸一下条件.
如果细胞量足够大,可以用分光光度计,如果量不足就考虑一下酶标仪,虽然不如分光光度计准确,但是线性范围内也是有效的.
我们做时是只测上清液的,通过上清的LDH量确定细胞死亡量的多少,如需要测死亡率,则需对残留细胞进行破碎使细胞内LDH渗出.不论是冻融还是超声都可以.
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兔唇[使用道具]
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多谢了!
所以我想问说明书上写的样本是血浆,能不能用来测细胞?我查到的公司上面都没提到样本是细胞,既然你已经做过了,那我也试试。
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kuaizige[使用道具]
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没做过神经元的LDH测定.不过做其它细胞时用过南京建成生物工程研究所的盒子,仅供参考.
一般的试剂盒内的说明都比较详细,但主要是测生物样本(血浆\均浆等)的,如测细胞还需要自己摸一下条件.
如果细胞量足够大,可以用分光光度计,如果量不足就考虑一下酶标仪,虽然不如分光光度计准确,但是线性范围内也是有效的.
我们做时是只测上清液的,通过上清的LDH量确定细胞死亡量的多少,如需要测 “死亡率”, 则需对残留细胞进行破碎使细胞内LDH渗出.不论是冻融还是超声都可以.

纠正: 不是“死亡率”,而是如需要测“存活率”则需对残留细胞进行破碎使细胞内LDH渗出.不论是冻融还是超声都可以.
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33号[使用道具]
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我最近也再做这方面的工作,用的试剂盒是南京建成的。
测LDH标准的方法是分别测定培养液和细胞内的LDH量,从而得到一个百分比来表示细胞的死亡率,但也有很多人只测了培养基里的LDH量,这是很不标准的方法。建议你把培养基和细胞内的LDH活力都测一下。
有一点需要注意,(个人经验,可以参考一下),神经元的密度要接种的高一点,这样才能一定程度上减少培养基对最后结果的干扰,因为我做时发现单纯的培养基对照组(即空白测定管)在440nm有一定的波长吸收,所以细胞量最好控制在10e5以上,才能减少培养基的干扰。

有事可以PM讨论下!
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kewanqi2011[使用道具]
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谢谢!
我是24孔板培养的细胞,所以细胞数还算可以,但是培养基就500ml,会不会有影响?
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duoduo[使用道具]
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培养基就500ml,会不会有影响?

什么意思?没看懂
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whitesheep[使用道具]
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培养基500ml多不多?
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101010[使用道具]
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应该是500ul吧
刚好我也是准备做这方面的实验,是测定缺氧损伤神经元的损伤指标。本想订建成的试剂盒,但此前在园内搜了一下,发现评价不高。就打算交给检验科测,但预测了一下,发现浓度很低,现正想怎么浓缩呢!我是测培养上清液内的LDH。
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101010[使用道具]
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哦!写错了,是500ul,用分光光度计吗?
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