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标题:[求助]MTT实验 空白孔 和 试验孔 差距不大

mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-2-11 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]MTT实验 空白孔 和 试验孔 差距不大



我做的肿瘤细胞MTT实验 铺板5300左右 做了几次都是 空白孔和实验室 差距不大
空白孔只是培养基：1640加上10%血清 实验组是细胞加含药培养基 阴性对照：细胞加不含药培养基
干预几小时后加20μLMTT 4小时后去上清加DMSO
490NM波长测定 空白和实验组差不多 肉眼看空白孔也是紫色
难道我的培养基可以和DMSO 反应？？？？
急求 请各位大侠指点原因以及解决办法
谢谢
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duoduo[使用道具]
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发表于 2012-2-11 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mamamiya 于 2012-2-11 16:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


我做的肿瘤细胞MTT实验 铺板5300左右 做了几次都是 空白孔和实验室 差距不大
空白孔只是培养基：1640加上10%血清 实验组是细胞加含药培养基 阴性对照：细胞加不含药培养基
干预几小时后加20μLMTT 4小时后去上清加DMS ...


我建议空白孔不要加培养基，也没必要测空白孔，我曾经做过空白对照，只加DMSO，测吸光值没什么太大差别，MTT的灵敏度在570nm比较高，试试！
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发表于 2012-2-11 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

MTT试验最终应该是检测570nm/630nm，以570nm为主波长，630nm为参比波长。
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发表于 2012-2-11 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

血清浓度太高，也可能影响吸光度。
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-2-11 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
MTT试验最终应该是检测570nm/630nm，以570nm为主波长，630nm为参比波长。

==================================================

支持, NIH 10 年前已正式提出報告: 【MTT要用570nm去測量.】
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小野花[使用道具]
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发表于 2012-2-11 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的肿瘤细胞MTT实验 铺板5300左右 做了几次都是 空白孔和实验室 差距不大
空白孔只是培养基：1640加上10%血清 实验组是细胞加含药培养基 阴性对照：细胞加不含药培养基
干预几小时后加20μLMTT 4小时后去上清加DMSO
490NM波长测定 空白和实验组差不多 肉眼看空白孔也是紫色
难道我的培养基可以和DMSO 反应？？？？
急求 请各位大侠指点原因以及解决办法
谢谢

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你的阴形对照结果怎么样啊？如果也很小的话，那就是你细胞接种密度过低造成的；
如果阴形与加药差距有的话，则派出细胞接种密度问题；
接下来，看看是不是药物学清中药物浓度过高所致，你可以试试含药浓度低点的学清试一试。
再就是没有必要设置空白孔。一般我连只加DMSO也省了，数据很小，可以忽略。
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-2-11 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先感谢各位大侠的回帖 受益匪浅 那我就不设空白了 呵呵 （PS：我在EP管里加了点培养基加了点DMSO发现是很明显的淡淡紫色，难道我的培养基真的和DMSO反应 也许是10%的血清的原因 以后的实验我要不要用小的血清啊）
我的结果 空白孔 阴性对照 实验组 数据都差不多用578NM单波长测量的话 都是0.5左右 周边不管是用PBS 还是用DMSO都有0.3左右
细胞数是有点少 48小时大概50%左右 我以后做会在这方面改进
6小时的时间点 用了578NM 参比630 数值很小 0.2左右 周边PBS很多是负值
还有不设参比630 只用578NM可否（实验室的机器只有这个最接近）
奇怪的是12小时的时间点 用490NM测 阴性对照有1.2左右 实验组有0.7左右 很明显的结果
但是用578NM测 这种效果又消失 再次检测阴性和实验组OD值差不多0.6左右
问题比较多 呵呵 菜鸟 还请大虾继续指点呵呵
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-2-11 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

药典三部MTT增值法测定全部采用双波长测定，570为测定波长，630为参比波长。
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66小飞侠[使用道具]
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 小中大

自己的试验不确定因素需要慢慢摸索排除不必要的影响。
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xueyouzhang[使用道具]
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 小中大
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波长用错鸟。
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