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标题:[求助]可以用LDH来测定细胞的存活率吗？

nn255[使用道具]
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发表于 2012-2-12 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]可以用LDH来测定细胞的存活率吗？



我养的是PC12细胞，我想通过测定细胞培养残液的LDH含量来测定存活率。有那位大侠用过南京建成的LDH测定试剂盒，或者是其他公司的试剂盒，或者提供一种新的LDH测定方法。虚心请教，请大侠们不吝赐教，谢谢。
我 看了很多文献发现别人测定存活率基本上用的都是MTT法，只是我想MTT方法对细胞数目的要求太高，我的细胞生长很快，按MTT那样养48h的话，都可以传一代了。
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-2-12 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用过南京建成的LDH测定试剂盒，还行。
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-2-12 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1600～2000rpm,10min.
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-2-12 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我准备买罗氏的LDH试剂盒，2000tests要3800多啊，有国产的吗？价钱是多少？楼上的兄弟做过国产的没有？效果如何？小弟也是在MTT上屡受挫折，才想换个方法测细胞生长抑制率的。
又：szm1023 朋友，加药后测定时间的选择要看你的细胞生长速度和所用药物的抑制强度，也可以选取不同时间段来分别测定，做一条时间依赖曲线。我看过的文献有测定6，12，24，48，72小时的，Pubmed上有不少这类文献，可以搜索一下！
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S6044[使用道具]
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发表于 2012-2-12 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用南京建成的试剂盒测定细胞的LDH含量，可不可以把培养基上清当成血清来测，用不用测定细胞的蛋白含量呢？

关键是把培养基作为什么来测？是组织匀浆还是血清，我现在很困惑，渴望大侠指导。

还有建成的试剂盒要求测定一个最佳加样量，并且它的说明书上附带了一个附录，我想说得就是这个最佳加样量通过什么来反映？象SOD还有一个50％的抑制率可以参考，这个完全就是自己主观判断了。看了半天也没有看懂它的附录上的那个曲线到底代表什么意义。
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羊咩咩[使用道具]
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发表于 2012-2-12 12:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好像上海同仁化学研究所有CCK-8试挤合，比较便宜，330多元。效果不错。
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-2-12 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

测存活率，最好用MTT。我认为LDH方法较为复杂，过程中人为因素较多！LDH测凋亡，坏死，存活的比率较好！
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-2-12 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家测定MTT的时候吸光度是多少？我在490nm处测得的吸光度值低于1，而在570nm处测得的吸光度值是在1.3～1.5之间，难道这样的吸光度值能够作为实验的依据吗？
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04906[使用道具]
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发表于 2012-2-12 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回答楼上的问题，我们做MTT实验时，不加药的对照组在570nm处测的OD值基本是在0.75~0.85左右,至于加药组目前多次测的差值过大，屡屡失败，还在摸索中。
我查的文献说对照组的OD值在0.75~1.25之间就可以了，这个值与每孔接种的细胞数、MTT的用量及作用时间有关，还有加入DMSO后震荡的时间长短也会影响这个值，如果你对现在的OD值不满意，可以通过调整以上几个因素来调整最后测得的OD值。
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