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标题:[求助]划痕实验和transwell检测细胞迁移结果不一致

hold住[使用道具]
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发表于 2012-2-12 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]划痕实验和transwell检测细胞迁移结果不一致




最近在做细胞迁移的检测，分别用划痕实验和transwell法进行检测，但所得结果截然相反，请教各位老师，我该信哪一个结果？
我的操作步骤大概如下：
划痕：
1，铺细胞至6孔板，张满后，划痕
2，更换培养基为无血清培养基
3，每12h观察一次
4，结果为加入处理因素的细胞迁移速率增加（独立实验2个重复）

transwell（8um）：
1，重悬10e5个细胞至无血清培养基，加入transwell（密理博产品）
2，底部加入含10%FBS的培养基
3，培养8h，及15h后，结晶紫染色
3，结果为加入处理因素的细胞迁移速率降低（每个时间点有三个重复）

请各位老师多多指教，先行谢过！
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-2-12 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

transwell 8h，16h是不是时间太长了？掉到下室的细胞计算进去了吗？我做迁移实验最长是4h。
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发表于 2012-2-12 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为我用的细胞不是肿瘤细胞，怕时间短，迁移不够。我再缩短时间试试.
我看了下室，没有细胞漏到下室。
另请教，下室的培养基是否也可以用无血清培养基？

因为我的处理因素,MTT实验显示是抑制细胞增殖的。

非常感谢！
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发表于 2012-2-12 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你下室如果也换成无血清培养基那细胞的迁移动力是什么？呵呵，血清梯度应该算是迁移实验的基础之一吧……
ps：我用的也不是肿瘤细胞系，你预实验可以多设几个时间点观察一下
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发表于 2012-2-12 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是，8um的transwell可以允许血清的通过，1h内上下室就已经没有血清梯度了啊
不知道我的理解对不对？
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发表于 2012-2-12 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是，8um的transwell可以允许血清的通过，1h内上下室就已经没有血清梯度了啊
不知道我的理解对不对？

==============================================================================================================

最小的0.4um的膜大分子照样能通过，呵呵，造成梯度的原因正是因为有这些分子可以自由穿过的小孔，血清成分可以从下室穿过小孔扩散入上室，当然，这个扩散有个过程，在这个过程中小孔附近的细胞会感知到这个营养成分的流动,从而逆着扩散方向向营养成分更高的环境迁移,打个不恰当的比方。这个过程有点儿像飞蛾扑火……。
至于上下室完全平衡的时间我没做过具体实验，但几个小时以内肯定差不多了，所以实验时间过长没有任何意义而且细胞还容易掉进下室。
以下是我的理解，仅供参考。原来我也很困惑，后来和corning的人交流过一次，他们也大致是这个意思吧。
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发表于 2012-2-12 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天又做了 分别选择2h 4h和6h 3个时间点，细胞量5*10e5

结果是：
2h时，处理组与对照组转移过去的细胞均很少
4h时，两个组均有少量细胞转移过去，但对照组明显多于处理组，大概在2-3倍左右。
6h时，还在等结果。。。。

但结合之前transwell的结果，基本可以确定transwell实验显示，处理组的细胞迁移能力下降。

如何解释这样一对截然相反的结果？

困惑
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hold住[使用道具]
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发表于 2012-2-12 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第6个小时的结果已出，很明显，对照组比处理组的细胞迁移数目大大增加。
图会稍后贴上。

请高手解惑。
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发表于 2012-2-12 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

wound healing experiment could be the result of cell proliferation.
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发表于 2012-2-12 13:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #9 fqswdzd 的帖子

谢谢您的答复
可划痕过程中我用的是无血清培养基，其次细胞增殖的结果是与划痕的结果也是相反的，即药物处理导致细胞增殖下降，而划痕细胞迁移增强。

请多多指教
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