[求助]我养的caco-2细胞传代后大多数细胞都飘了起来？

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标题:[求助]我养的caco-2细胞传代后大多数细胞都飘了起来？

jkobn[使用道具]
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发表于 2012-2-13 16:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我买的caco-2细胞，传第一代状态很好，再次传代时，第二天去看，大多数细胞都飘了起来，剩下的细胞换液后长的很慢，大概长了半个月，才长满，消化传代后，又是大多数都飘了起来，不过这次剩下的细胞没有长，一直就是原状态，不知道是什么原因？
用的培养基：DMEM,10%FBS,双抗，是不是应该加非必须氨基酸？
操作时，因为细胞吹打不开，吹打的时间比较长，大概吹打了1小时，不知道有没有影响？
另外，想问一个问题，冻存的细胞保存在-80℃冰箱能保存多长时间呢？
谢谢！

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-2-13 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的细胞和你的细胞一样的命运，已经养了几个月了，都不见好。又买了新细胞，还在摸索呀，不知这次怎么样？盼高手指点指点

101010[使用道具]
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发表于 2012-2-13 17:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞培养技巧自然重要，不过最关键的一个因素应该是细胞来源可能就不好，我养过Caco2这个细胞，虽然用来做实验的时间不长，但养起来没有遇到任何困难，我想差别主要还是在细胞来源的状态上。

冻存的细胞在－80度保存建议不超过1个月，存活性视细胞而定了，有的放2年没有问题，有的放1个月状态就不好了。最好还是在－130度以下。

CACO2不加NEAA也可以养几代，但我没有试过长期不加NEAA养会是什么状况的。有些细胞我试过，如果是必须加NEAA的，不加NEAA，会越养越差。

ps:你这个吹打1hr，太狠了。。。。。。一般不要超过10次。回头我复苏一个caco2，给大家看看照片吧，这个细胞不是象fibroblast那样延展性很好，但也不至于要这样吹打分散。

greenbee[使用道具]
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发表于 2012-2-13 17:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是买了养养了死最近都不敢养了你养的怎么样？在北京吗状态好的话可否给我一点细胞谢谢

u234[使用道具]
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发表于 2012-2-13 17:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问大家养的Caco-2细胞在哪里买的

fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-2-13 17:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我北京买的，现在是第二回。第一次买回来后，传代2天都不贴壁，我以为污染了，就另外再买了一株，现在就是一副老长不满的样子...哎...

duoduo[使用道具]
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发表于 2012-2-13 17:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问加多少NEAA呢

gogo[使用道具]
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发表于 2012-2-13 17:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

前辈们，你们好！我最近也在杨这个细胞，不知道你们的小保养的怎么样了？我都快郁闷死了！先前买一瓶，传代之后一直不贴壁，我想大概是消化的太重了，又要来一瓶，消化不厉害，细胞基本是我吹打下来的，但是细胞不是单个存在的，抱团。现在已经传了一周了，还没有贴壁，很着急啊！我用的培养基是DMEM+20%FBS（Gibico）+双抗。看说明书上好像要加非必需氨基酸，一定要加吗？对细胞的影响大吗? 请各位指教！