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标题:[求助]测定细胞内PH值的方法

lagua123[使用道具]
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发表于 2012-2-13 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]测定细胞内PH值的方法



我现需测定大鼠肝细胞的PH值，望大家指教
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-2-13 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我换荧光探针，就做出来了
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-2-13 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用的什么荧光探针啊？
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lagua123[使用道具]
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 小中大

回复 #3 vvmmoy 的帖子

dcef，建议用mp公司的。
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 小中大
dcef，建议用mp公司的?
我查了没找到这个DCEF啊？
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c86v[使用道具]
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 小中大

用的同仁化学研究所的BCECF-AM
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-2-13 18:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
给你贴一个ATCC HK-2细胞的培养方法供参考，（引自ATCC）：

ATCC complete growth medium: Keratinocyte-Serum Free Medium (GIBCO-BRL 17005-042) with 5 ng/ml recombinant epidermal growth factor and 0.05 mg/ml bovine pituitary extract
Temperature: 37.0C
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Growth Conditions: Cell growth is dependent on epidermal growth factor. The cells should not be allowed to become confluent. Subculture at 80% of confluence.

Subculturing: Protocol:
Remove and discard culture medium.
Briefly rinse the cell layer with 0.05% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor.
Add 2.0 to 3.0 ml of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes).
Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal.
Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.
To remove trypsin-EDTA solution, transfer cell suspension to centrifuge tube and spin at approximately 125 xg for 5 to 10 minutes. Discard supernatant and resuspend cells in fresh growth medium. Add appropriate aliquots of cell suspension to new culture vessels.
Incubate cultures at 37°C.

Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:4 is recommended

Medium renewal: Every 2 to 3 days
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-2-13 18:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
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另外，站内的兄弟们也有经验，请往下看：

肾内的同学养过,有点骄气,不是太好养,HK-2细胞(肾小管上皮细胞)培养:
培 养液:用含10%胎牛血清的DMEM培养基，PH值7.2－7.4，新鲜配制的不用加谷氨酰胺，超过2周后加入1ML／100ML培养基。如果长得不好, 可以提高胎牛血清的浓度到20%左右,培养瓶最好用添加EGF的明胶或胶原裱衬，浓度一般是1－3mg/ml,不用也行,有的人也添加VEGF，浓度一般 是10-50ng/ml,常规加碳酸氢钠和双抗。在37℃、体积分数5% CO2的条件下培养.
细胞贴壁生长，胰酶每2～4d传代1次.也有用M199培养基的.其他一样.
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-2-13 18:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好，请问您是上海地区的吗？我做实验需要HK-2细胞，能不能送我一点，或者我拿别的细胞株跟您交换一下，我这有OK细胞，3T3细胞等。
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发表于 2012-2-13 18:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HK-2细胞很娇贵，不好养，血清要求比较高，楼上的说提高血清浓度，我不赞成，因为提高血清浓度后，细胞形态容易发生改变，由铺路石样变成成纤维细胞状了。推荐进口血清。传代的时候胰酶浓度可以低一点，我记得ATCC是推荐0.05%的胰酶浓度。消化的时候用PBS稀释一下就行了。
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