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标题:[求助]换液后293细胞形态改变

dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-2-15 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]换液后293细胞形态改变



我养的293细胞换液后形态突然改变，这种形态改变的情况也不是每次换液后都出现，是有是无。。。

培养液是同一种，使用前都预先复温了的。

简述下昨天操作后细胞形态改变的换液过程：吸取原先的培养液并弃去，没有用PBS清洗细胞，然后加入新的培养液。

在显微镜下观察即发现了细胞形态的改变...

附上细胞换液前后的形态改变，烦请大家看看是什么原因。


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发表于 2012-2-15 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

形态改变后的图片


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发表于 2012-2-15 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
培养液预热了吗，还是楼主吸出液体后，细胞放的时间过长了，细胞变得可真糟糕。培养基要预热37度，换液要尽量快，PBS洗没有必要，有的操作还只要求换一半液呢·，因为细胞生长过程中会释放一部分生长因子在上清中，生长过成要尽量保持环境的稳定，同时还要保证营养，所以要换液增加营养。之前我们老板说，养细胞就跟养小孩一样，你要稍微对它不好，它准给你好看
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发表于 2012-2-15 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

培养基没有预热，但是室温下复温了半个小时，温度应该有30°左右的

吸出液体后，细胞没有放置，直接加入了新的培养液。

从换液前的细胞状态来看形态都还不错，不知道为什么换液就出现这个情况
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-2-15 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞不用每天都换液，换液时要温柔对待，你的细胞可能就是换液时，培养基温度，或者PH不对付造成的。
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发表于 2012-2-15 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
问题是我没有每天都换液。。。也没有粗暴对待。。。

培养基的温度和PH值不可能说有根本的改变，因为前后用的培养基完全是同一瓶。。。

也不是每次换液就出现这个样子，只是出现过几次，所以我才觉得特别奇怪。

主要是我做转染的时候
以前用的lipo2000，都是用无血清的培养基将lipo2000和质粒配置好后，吸去细胞的培养基后，然后加入混合物，这时发现细胞形态的变化，我一直认为是lipo的毒性或者是因为lipo和质粒混合后进入细胞对细胞产生了什么影响。

后来换用了jetpei的转染试剂，这个试剂只是配置的时候用NaCl混合，然后加入含血清的培养基就可以了，我也是配置好试剂，混合后，将要转染的孔板内的细胞的培养基吸去，然后更换了新的培养基，就出现了上面图片中的细胞形态变化。
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发表于 2012-2-15 13:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我复苏了实验室留下来的293细胞，两天后看细胞发现培养基变成金黄色并有些浑浊，以为污染了，但是显微镜下没有污染。 镜下细胞形态就和上病变图片差不多。

但是今天我看细胞，形态已经和好细胞差不多了。我想楼上的细胞还能变好。
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发表于 2012-2-15 13:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很郁闷,我养的也是293T细胞,最近发现给细胞换液后也出现了和楼主一样的情况,在换用别的实验室的培养基\胰酶\293T细胞后还是一样,细胞变形后继续培养,第二天还是能长好,不知道是什么原因,快弄崩溃了!不知道楼主最后怎么解决的!
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 小中大

在下养293的时候也观察到，每次换液后细胞回缩，不过没lz的那么严重，但培养箱中呆几个小时之后就好了~~~认为属293的正常反应~
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BUK[使用道具]
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 小中大
我养的293T细胞和您描述的一样。
因为楼下实验室的师兄和我养的一样，但没出现我这种情况，并且我最近包病毒后用病毒去感染目的细胞都看不到荧光，折腾了好几个月了，现在纠结要不要再去买细胞，不知道你用293细胞包病毒的滴度怎么样？
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