[讨论帖]我的实验成长日记

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论帖]我的实验成长日记

40 1/4 1 2 3 4 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[讨论帖]我的实验成长日记

DNA[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73137
精华 1
积分 429
帖子 494
信誉分 102
可用分 3291
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态离线

发表于 2012-2-15 14:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我现在开始做实验，感觉真是很多学问。以前看到别人摆弄一些瓶瓶罐罐，以为就是很简单的事情，到现在才明白原来经过了一番辛苦的设计之后，下来的等待实验结果的心情是很难耐得，能够在实验室里默默操作等待着一个实验结果，需要一定的悟性和定性。
这两天我就在重复着一些技术员的活。我们的研究所条件算是中等的，不算是高级。细胞培养的设备也是很齐全，但是细胞培养室、准备室等等不是分隔得很严格，进入培养室不用穿隔离衣。在超净台上操作也不用带口罩和帽子，只要用75%的酒精擦洗一下双手就行了。有大约4个超净台，但是在操作的间隙时不会开紫外灯消毒的，因为多人在培养室里。只有在每天的实验结束后，将紫外灯打开消毒。

DNA[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73137
精华 1
积分 429
帖子 494
信誉分 102
可用分 3291
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态离线

发表于 2012-2-15 15:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我知道在这个论坛里的很多人都和我一样才开始进入实验室，大家可以来共同交流一下自己的实验和实验中的一些难忘的片段。我只是觉得一天的实验下来，虽然好像没有干什么事情，却特别的疲惫。希望和大家交流一下体会和感悟，也算是对自己的实验经历的一些总结。

DNA[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73137
精华 1
积分 429
帖子 494
信誉分 102
可用分 3291
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态离线

发表于 2012-2-15 15:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的导师对我说万事开头难，熟悉了实验的规程也就不再有什么害怕的了。花一个下午知道怎么配试剂也是一件有收获的事，我到现在还没有着手配试剂呢，有很多细节需要注意，到我亲手配完了，我也要总结一下试剂的配置方面的tips。希望我们共同进步，顺利完成实验！

october7[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 77254
精华 0
积分 448
帖子 616
信誉分 100
可用分 3856
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态离线

发表于 2012-2-15 15:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我看了rubyberry写的成长日记，我竟有同病相怜感，实验室的规范化我觉得实有必要，如查每个来实验室的人都从泡酸洗管子开始学起，那我们都不用做实验来完成课题了，而且我觉得初学者刚开始都做不好，花费了大量的人力，何不将实验室统一管理，专人负责实验器械的准备？我们实验室甚至连tip头和盒都要自己买，所有的所有都是自己准备。

DNA[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73137
精华 1
积分 429
帖子 494
信誉分 102
可用分 3291
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态离线

发表于 2012-2-15 15:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵
最近在等待我的细胞株的到来，并且配置一些基本的试剂，培养基和胰酶什么的，我希望能够准备的全面好一点，这样遇到什么不如意和困难也不至于慌了阵脚。有人对我说在科研中最重要的是解决问题和最终的论文发表，我觉得很对，最终就是为了一篇成功的论文。
今天我听了一些博士的开题报告，认真分析了一下应该具备的科研思路。概括起来，就是创新性、聚焦点、纵深拓展。有的博士在选题方面谈的是口水题，几乎是重复前人的东西，只是用更先进的方法检测之；有的是铺开层面，只是在某一层面上测试多种基因或分子，在某种程度上来说可能很有必要，但让人眼花缭乱，不知所云。而且，仅仅着重一个层面，却没有纵深方面的拓展，既浪费了精力，又使得自己的课题的创新性和力度不够。
现在我是以一个初接触科研的硕士的眼光来看待问题，可能还是有偏颇之处。看到别人的不足，可以提醒自己，并且避免犯这种错误。在这里记下以警自己。同时谢谢战友们的关心，这让我更有信心继续自己的实验，不断完善。

DNA[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73137
精华 1
积分 429
帖子 494
信誉分 102
可用分 3291
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态离线

发表于 2012-2-15 15:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

今天偶然要去-20度冰箱里拿东西，却发现自己前几天配好的冻存的培养液由于冻时体积膨胀，已经把分装的试剂瓶给撑破了！一些冰冻成块的培养液就在冰箱的最底处。好心痛！在冻存时我预计可能会有体积膨胀些，预留了15ml的空间，却想不到还是不够的。我想大概250ml的培养液在冻存时应该预留50ml的体积才对。
没办法，只好把培养液先放到4度的冰箱中先冻融，明天再重过滤分装一次。以后再也不犯这种低级错误了！

toy[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77357
精华 0
积分 716
帖子 1052
信誉分 100
可用分 6165
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态离线

发表于 2012-2-15 15:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

都一样，我洗瓶子，配东西，中间还有别的事一耽搁，整整准备了两个星期，前天终于把细胞养上了，总算长得还行
前段时间准备东西，配东西，都有点走火入魔了，整天想这怎么配，那怎么配，灭菌灭好了没，可别污染了，Ph值到底调多少，唉，现在总算清楚了。。。。。。。。。
整天特别累，但一想还是在准备阶段，细胞都不知何时养上，就很郁闷。
都是新人，大家一起努力吧，加油：）

is2011[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75851
精华 0
积分 510
帖子 680
信誉分 100
可用分 4233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态离线

发表于 2012-2-15 15:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的实验条件也不怎么样,关键是没钱,不过也还要做呀,第一次复苏的细胞没养好,已经倒掉了;昨天又复苏了一管,今天换液-无菌操作很关键,希望大家互相鼓励,互相帮助,一直坚持下去.

DNA[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73137
精华 1
积分 429
帖子 494
信誉分 102
可用分 3291
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态离线

发表于 2012-2-15 15:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，今天是一个喜出望外的日子，昨天收到我的细胞寄出的消息，本以为会明天到，想不到今天中午就已经收到了，真是开心。
细胞购自武汉中国典型培养物保藏中心，EMS的速度只需要一天半的时间到货。培养瓶充满了培养液，瓶口用封口胶密封了起来。
这些天一直看别人在做细胞培养，轮到自己的时候兴奋劲一过就开始有一点手足无措了起来。我按照无菌操作的规则，在超净台上将培养瓶中的培养液用吸管转移到离心管中。在倒置显微镜下观察，细胞的长势还是不错的，大约有50%confluence。估计放入CO2培养箱中，明天早上就可以传代了。
呵呵，大家一起加油啊

DNA[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73137
精华 1
积分 429
帖子 494
信誉分 102
可用分 3291
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态离线

发表于 2012-2-15 15:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

真是没有料到，细胞传代后状态就不怎么好了。
我用的0.25%的Tripsin/EDTA消化。
取长满细胞的培养瓶，吸去培养液，用消化液冲洗了一下，立即吸掉冲洗液，加入大约1ml消化液，在细胞表面滚动了4-5圈后立即将消化液吸去。再加入大约1ml消化液，滚动4-5圈后吸掉消化液，仅余细胞表面少量消化液。
放到显微镜下观察，细胞仍然是贴壁的。我将培养瓶放入培养箱中，拧松瓶盖。三分钟后，取出培养瓶，在镜下观察细胞胞质回缩，间隙变大，有部分已经脱落。
我立即又进入无菌操作台，于培养瓶中加入少量培养液，在细胞表面来回流动了3-4圈，算是终止了胰蛋白酶的作用。吸去冲洗液后，加入了大约5ml培养液，在培养瓶中用吸管反复冲洗细胞贴壁的那一面，大约冲洗了大概有100下，后拧紧瓶盖，在显微镜下观察见大量细胞都已脱落，而且大部分是单个的细胞，即单细胞悬液是制作成功的。
随后我用一滴滴入血细胞计数池。余下的细胞悬液平均分于3个细胞培养瓶（加上传代用的细胞培养瓶）。每个培养瓶加入培养液使培养瓶中培养液的体积达到大约5ml。
镜下观察，细胞的接种密度应该是足够的。这里要说明的一下，我用的是原来寄送细胞过来时，细胞培养瓶中充满的培养液。因为我怕细胞不适应这里的培养环境，所以用了它原来的培养基。
像我培养的RL95-2细胞，是一种肿瘤细胞，因该在2-3小时内贴壁，第二天换液时应该全部贴壁才对。可是第二天去看时，细胞几乎仍然处于悬浮状态！这是怎么一回事呢？
我仔细考虑了我的操作，又向其他的师姐们询问。操作几乎没有什么明显的错误，细胞消化是也没有过渡。可是为什么细胞不贴壁呢？难道是不适应这里的培养条件？可是我用的是它原来的培养基阿！
师姐们的意见是：培养基的问题。在细胞寄送过来的时候，虽然培养液时充满培养瓶的，可是毕竟含了许多细胞代谢物，对于传代细胞有害。
也有师姐认为：在细胞传代过程中应该在制成细胞悬液后离心后去掉上清液，然后再加入新鲜的培养基制成细胞悬液，这样才能够彻底终止胰蛋白酶的作用。
现在的我也是六神无主。寄送来的细胞是多么珍贵，可是才传代一次就已经不景气了，我还没有冻存保种。想想真是很伤心，对于我的实验积极性是一个严重的打击。
同志们，给点参考意见？我怎么也想不通，怎么就这么不景气呢！都说肿瘤细胞株怎么养都不会死的。看来我是不太能够养这些小东西的。
今天看到一瓶又零星的贴壁，换了自己的培养基了，然后又加了一些血清。希望明天再去看的时候能够景气一点。

40 1/4 1 2 3 4 ››