[求助]养3T3-L1细胞群友分化液中胰岛素和地塞米松...

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标题:[求助]养3T3-L1细胞群友分化液中胰岛素和地塞米松...

缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-2-15 16:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位好，傻傻地养脂肪细胞好几个月了，平时都是看你们的讨论，非常感激！我一直都是使用科室诺和灵R和地塞米松磷酸钠注射剂配制分化液的（胰岛素10ug/ml，地米1umol/l），失败远远多于成功，附上一张久久一次像样的图片。春节前怀疑过细胞代数高，最近刚从上海中科院买了一瓶。最近还是在郁闷中，细胞在加分化液2的前后都整层漂浮起来，除了分化时机没把握清楚外，我还是担心分化液的试剂。所以请问有没战友跟我一样用科室胰岛素和地塞米松呢？你们配的浓度多少？

附件

2012-2-15 16:51

14233813.snap.jpg (271.08 KB)

缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-2-15 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再有，本人真的还把握不到什么叫融合？细胞之间一接触就算融合，还是要等到100%长满？所以附上三张图片，请问你们是在哪张密度时加入分化液1的（注意哦，我问的是加分化液时的密度而不是融合图片）？

第一张

附件

2012-2-15 16:52

75423075.snap.jpg (265.58 KB)

缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-2-15 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第二张

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2012-2-15 16:52

55438194.snap.jpg (297.67 KB)

缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-2-15 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第三张（我最近就在这张的密度时等两天后才加分化液1，结果，两天后一加分化液2，整层飘起来，并且回缩在液体中间，回想起来，应该是密度太高，何况我还再等了两天）

附件

2012-2-15 16:54

25707224.snap.jpg (286.5 KB)

66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-2-15 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也在养这种细胞，最近在诱导分化，我们可以交流下

is2011[使用道具]
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发表于 2012-2-15 17:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

新手请教，脂肪细胞分化诱导剂具体怎么配制啊？谢谢啊~~~

qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-2-15 17:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有哪位战友可以告诉下具体配制方法，我怕需要配制DEX,IBMX,INSULIN,和油酸，谢谢

dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-2-15 17:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

IBMX

0.5uM

0.5uM

0.5mM

0.5mM

Dexamethasone

1uM

0.25uM

1uM

0.5uM

Insulin

167nM

5ug/ml

10ug/ml

10ug/ml
文献中有用到这几种配方的，我是用DMSO配置的1000×的母液

dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-2-15 17:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再加入诱导液后细胞因为产生脂滴而贴壁不牢固，很容易漂浮，可能是诱导液浓度太高的问题（个人怀疑），在降低诱导液后，这种状况稍微改善，但是细胞还是出现了向中心皱缩现象，不知什么原因了？

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发表于 2012-2-15 17:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

诺和灵R和地塞米松磷酸钠注射剂应该是个问题吧，楼主不能买试剂吗，有时候为了省点钱可能浪费更多时间精力再加上浪费的培养基等乱七八糟实在不合适。。。。诱导用的胰岛素是活性成分，但人注射用胰岛素肯定加一些蛋白什么的之类的辅剂用来控释什么的吧，就像咱们吃的药里面不光有效成分还有淀粉、硬脂酸镁等等甚至糖衣、胶囊外壳一个道理，用这个养细胞不行吧。。。。。。。

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