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标题:[求助]内皮细胞的培养

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-2-18 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]内皮细胞的培养



我想培养 大鼠 股静脉内皮细胞 ，看了很多文献 我现在用的是DMEM培养基 细菌都没有培养出来 一个 ，，，看到 有ECM 内皮细胞培养专用的培养基 ，不知道有用不？我看ECM 中含有ECGS 等 ，不过价格贵哦 1000多，我想问一下 可以买ECGS来配不》？还有 消化用什么啊 ？胶原酶 怎么选择 I 型 还是 2型 ？？还有 用于人内皮细胞培养的 ECGS 能用在大鼠的内皮培养不？
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-2-18 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. 原代培养内皮细胞，必须用专用内皮细胞培养液，其他的培养液都不可能成功；
2. 最好别自己配制，很难搞出最优配方的；
3. 1型胶原酶或者胰酶都可以。
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发表于 2012-2-18 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用过ecm培养基，一套1200左右吧。算起来和自己配也差别多。生长因子要800左右，加fbs进口的，再加培养基，价格也差别多上千了。还不如用配好的，质量也稳定些。
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彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-2-18 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我上官方网站查询时90多美元 不过 我们准备公司说 进口卖给我 要乘16 ，好贵啊，
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彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-2-18 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ECM培养基 没有 肝素 和谷氨酰胺哦 ，好像 也要自己加点
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misswu61[使用道具]
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发表于 2012-2-18 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

原代很难养的 如果有细胞株卖 不差钱的买点做实验吧 不然实验在原代上会耽误很长时间 如果没有卖鼠的股静脉内皮 看看可不可以用别的内皮代替 不知道你要做什么实验 如果需要用大量细胞的实验 尽量不要用原代 很难大量增殖 且生长速度很慢 穿不了几代就衰老死亡了 如果你一定要养原代内皮 那么就不要怕花钱 最好少看中文文献 尽量用好的培养基比如上面说的1000多的 还有就是污染问题 一定要控制好
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发表于 2012-2-18 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我没有买细胞株，是考虑：
1、卖的价格太贵
2、万一买来的一不小心没伺候好，污染了，不好交代
3、内皮细胞不同部位来源性质有很大差异，如有些通道有些受体的表达在不同部位都有差异，你不能拿这个来说明那个的问题
4、即使内皮细胞株，传的代次也有限。比如HUVEC，传着穿着就变异了。所以，如果买了株，试验要尽快做完。原代的试验，也最好用2-4代的细胞有说服力。传代次多了也没有意义。
5、我也纳闷。我看了好多片相关文章，为什么老外原代培养的就是DMEM加FBS纳闷简单，而国内的文章及学术论文大都要加生长因子呢？
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发表于 2012-2-18 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的原代内皮细胞用的1000多的培养基 内皮细胞系用的50块钱的培养基 所以省钱还是很多的 呵呵 我养过原代的脑血管内皮细胞（兔子的） 而且长得非常好 但是做实验的话 细胞数还是有点不够 状态也很难维持到实验做完 所以要不断的做原代 不断的养细胞
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-2-18 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

内皮细胞很难培养，即便培养成功了，传代次数也是很有限的，耗时耗力。我做这方面几乎做了一年，很痛苦的。最多也就传到4代，后面的就生长很慢了。
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zhezhe[使用道具]
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 小中大

那我想问的是看到园里很多都是说培养液里的L-谷氨酰胺在两周就差不多降解了，还要再另外补加，那这样的话，即使啊上面几位提到的ECM或者我们原来也听说的EBM加因子之类的也是要补加谷氨酰胺的吗？？谷氨酰胺对于内皮细胞的生长是必须的吗？谢谢各位了
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