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标题:[求助]细胞凋亡检测试剂的选择

kswl870[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞凋亡检测试剂的选择




大家好！ 本人第一次进行细胞凋亡检测试验（想选用荧光显微镜进行检测)想请问大家
1.平时选用什么试剂盒进行细胞凋亡检测？2.选用的的是哪家公司的试剂盒啊？3.使用效果咋样？国内有这几家公司（碧云天、凯基）的试剂盒咋样啊？
没有经验，虚心向大家求教！！望能和大家共同讨论！
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october7[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、Annexin V-FITC，也有用Hoechst33342PI 的（便宜）
2、BD
3、效果可以
国产的多是买的国外的自己进行分装，实验试剂这东西，经费少的话可以试试国产，经费足或者对结果要求高建议还是就直接用国外的好
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发表于 2012-2-18 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不妨试试我公司的Annexin V-FITC&PI产品，绝对价廉物美。联系方式在你的“短信”中。
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发表于 2012-2-18 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在选择凋亡检测方法上，可根据实验目的、实验需要和实验设备进行选择。下面是各种方法的优缺点：
（一）定性和定量研究
• 只用于定性的研究方法：常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察（普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜）
• 进行定量或半定量的研究方法：各种流式细胞仪方法、原位末端标记法、ELISA定量琼脂糖凝胶电泳。
（二）区分凋亡和坏死
• 可将二者区分开的方法：琼脂糖凝胶电泳，形态学观察（透射电镜是是区分凋亡和坏死最可靠的方法），Hoechst33342/PI双染色法流式细胞仪检测，AnnexinV/PI双染色法流式细胞仪检测等。
• 不能将二者区分开的方法：原位末端标记法（TUNEL）、PI单染色法流式细胞仪检测等。
（三）样品来源不同选择
• 组织：主要用形态学方法(HE染色，透射电镜、石蜡包埋组织切片进行原位末端标记，ELISA或将组织碾碎消化做琼脂糖凝胶电泳)。
• 培养的细胞：几乎所有方法
（四）区分不同的凋亡时期
1、早期检测:
1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测（Annexin V单染法；如果Annexin V-FITC&PI双染，可将早期凋亡和晚期凋亡、坏死细胞区分开来）
2)细胞内氧化还原状态改变的检测
3)细胞色素C的定位检测
4) 线粒体膜电位变化的检测
2． 晚期检测：
细胞凋亡晚期中，核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180-200bp的DNA片段。
对于晚期检测通常有以下方法：
1) DNA Ladder法
2) TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记)
3) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)
4）Telemerase Detection (端粒酶检测)
如果选用Annexin V-FITC&PI凋亡检测试剂盒，我公司的绝对价廉物美！
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发表于 2012-2-18 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问一下AnnexinV-PE是单染还是双染，我的细胞转染了绿色荧光标记的干扰片段，请问我该用哪种试剂盒？
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发表于 2012-2-18 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Annexin V-PE是红色荧光的，一般是单染。主要用于转染了绿色荧光标记的细胞的凋亡检测。因为用的人少，因此很少有公司大规模标记。我原来就有用PE标记的想法，但用的人实在太少。
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发表于 2012-2-18 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼上的群友，如果我用Annexin V-PE来检测细胞的凋亡情况，它只能检测早期凋亡吧？如果这样发文章编辑会不会质疑啊？构建的载体含有绿色荧光这个事实不能更改了，不知怎么办，请各位战友帮忙想想办法。
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plaa[使用道具]
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 小中大

当然是早期凋亡，用Annexin V检测出来的肯定是早期凋亡，和用什么标记无关。
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发表于 2012-2-18 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞凋亡这种东西已经是常规试剂了，不是很难的，我勇敢凯基公司的，质量还可以 。

如果你仅仅是一般地细胞凋亡，可以用Annexin V-FITC&PI，这个凯基公司有的，我用过。好像是20T，5-600RMB

如果你还涉及到了细胞内本身表达报告基因,诸如(E)GFP之类的,你可以买BD公司的Annexin V-PE/7-AAD(cat no. 556422).

如果你想更简单的，就像别人要点点DAPI，染色观察，凋亡细胞和正常细胞的细胞核染色不一样的。
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is2011[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在看了一下lz的回帖，果然是有报告基因的，建议你用Annexin V-PE/7-AAD(cat no. 556422).
不过试剂有点贵，而且到货也不是很快。

你可以用我这个试剂去咨询一下你们流式细胞室的老师。

我记得我师姐的细胞当时是转染了EGFP的，就是用的Annexin V-PE和7-AAD染色做的，我们流式细胞室的老师说是用第三通道做的，BD的机子。
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