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标题:[求助]CIK细胞如何培养

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发表于 2012-2-18 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]CIK细胞如何培养



做了两次从两个患者的骨髓提取的单个核细胞做诱导，都不好。具体如下：
第0天，提取单个核细胞后用AIM-V无血清培养基培养，计数调整细胞浓度为1000000个/mL，加入IFN-γ1000U/ml，在小的培养瓶（25平方厘米）培养，5毫升无血清培养基，细胞密度为1000000个/mL，置37℃、5%CO2 孵箱中培养24h
第一天即24h后，加入IL-2 300U/ml，CD3 50ng/ml，IL-1α 100U/ml继续培养，此时细胞状态良好，圆亮。
第2天观察细胞状态和昨天差不多，只是感觉个有点变小
第3天观察细胞状态变差，细胞数量减少较多，死细胞较多，细胞个小，出现许多个细胞粘连成片，不是成团。
第4天，换液计数，仍然调整细胞浓度为1000000个/mL，补加IL-2 300U/ml。细胞死了八分之一，个小，还有细胞连成链状。
第5天观察细胞数量更少，状态同第四天

以上是参考某篇关于无血清培养CIK细胞的文献而做的，我做了两次，第一次做第3天时细胞就几乎死完，本来还准备3天换次液。第2次时变成2天换液，还把其中一瓶的细胞浓度减半培养，结果和第一次做的差不多，唯一不同是现在细胞撑到了第五天还没死绝。。。。反正细胞是越来越少了，郁闷啊，人家培养的细胞是越来越多，我却相反，我都不知道啥原因。。。。。
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发表于 2012-2-18 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用无血清的AIM-V培养基培养效果没有用1640加10%小牛血清或人AB血清培养细胞长的效果好。建议0天时用10%自体血清刺激一下，细胞密度调高点有助于群体效应促进细胞生长。
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发表于 2012-2-18 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 langlang 的帖子

谢谢，现在正准备换1640培养
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发表于 2012-2-18 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在养CIK细胞，遇到了和你一样的问题，昨天刚刚又复苏了一批脐血单个核，换成了1640，希望这回效果能好些。
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发表于 2012-2-18 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想请教下关于CIK细胞培养的一些问题，不知能否帮下我
1、开始时细胞接种浓度是多少合适
2、您培养时一般几天换液
3、换液是半量还是全换，还有全换液和半量换液后是否补加何种因子,补加的量是多少
4、换液时是否重新离心计数，因为换液时细胞浓度已经发生变化，不好掌握补加因子的量，但是计数也会使细胞丢失，而且会使成团细胞分散，不知您是如何做的
5、如果计数的话，发现细胞增殖后是否需要调整细胞浓度到初始浓度
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发表于 2012-2-18 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我自己的经验：刚接种的细胞头几天会减少的，然后会慢慢长起来的

不知道你的细胞是复苏后的，还是新鲜的。复苏的要洗净，不然DMSO影响细胞的活性，几天后细胞会死亡的，这种情况我遇见过
细胞接种的密度是1×1000000/ml，AIM培养基可以加入10%的台牛血清，细胞状态会好些
换液最好半量换，2-3天换一次，根据培养基的颜色变化决定。要离心换液，离心前后细胞计数，调到上述的细胞密度，按全量加入细胞因子。成团细胞分散不用担心的，细胞会聚起来的

希望自己的经验会对你有帮助吧
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小螺号[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

培养基内要加自体血清或者白蛋白.
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greenbee[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用CIK细胞治疗肿瘤近千例,每次培养的CIK细胞数为10亿以上,每例病人一个疗程为10次.细胞生长一直都比较好,在此请注意如下问题
1,用1640和小牛血清及AB血清
2,在进行培养之前,所用的所有细胞因子要进行活性检测,因为细胞因子的活性可以受许多因素影响,其中有一种细胞因子活性达不到要求,均可引起细胞生长不好.
3,所用的CD3单抗最为关键,有的CD3单抗需要固相包被才能诱导CIK细胞增殖,有的可以液相培养.
4,培养后的CIK细胞必须CD3CD%56细胞表达达50%以上才能说培养成功
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greenbee[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外你培养初期的细胞密度太高,200000/ml即可
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发表于 2012-2-18 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在感觉细胞倒是活着，也有扩增，但是扩增慢，也不多，而且虽然死的没以前快，但感觉还是比扩增的快。于是细胞总的数量总是在减少。

。。。。。。这又是为什么呢？？
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