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标题:[求助]请教THP-1细胞的培养及分化(求详细步骤)

DNA[使用道具]
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[求助]请教THP-1细胞的培养及分化(求详细步骤)




由于原代的单核细胞提取量少,决定用细胞株来做。想用PMA刺激THP-1细胞分化成巨噬细胞。有如下疑问:
1 THP-1买来后传代,一般传到第几代就不好用了
2 冻存液如何配置,我查到的是90%灭活血清+10%DMSO。每毫升冻存液里应该存多少个THP-1细胞?做实验时我可以复苏1管细胞后再传一代用来实验吗?
3 PMA如何分装?我查到的是:1mg PMA溶于1ml DMSO,然后分装到100支EP管中,每管10vl,存到-80度或-20度里,请问-20最多能存多久?每次实验用无菌PBS稀释还是用别的?
4 PMA刺激THP-1分化成巨噬细胞,PMA浓度跟对应的THP-1浓度,大家都如何设的,诱导时间分别是多少?中间要换一次液是吧?因为我查的是刺激5天
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49888[使用道具]
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我的实验也需要THP-1细胞株,这种细胞好养吗?
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回复 #2 49888 的帖子

据说好养,我还没买到,协和最近不能提供细胞,你是哪里的?
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dongdongqiang[使用道具]
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回复楼主:
1.THP1细胞可以传恨多代,所以不需要担心细胞活性问题,只要足够好的培养基和血清。推荐hycolne或gibco液体1640,含HEPES,加hyclone德胎牛血清,否则细胞活性会有影响,我们试了很多种国产血清,都不好,还有最好是含有HEPES的1640;
2. 冻存液:75% 1640+20%胎牛血清+5%DMSO (ATCC里边有说明);
3. PMA还可以用无水乙醇配置,但不管是无水乙醇\DMSO,要注意它的终浓度最好小于千分之一(DMSO),乙醇好像是千分之三\五,溶解分装至EP管,避光,-80度保存最好是乙醇配置,这样-80度不会结冰;
4. PMA刺激THP1只要6h左右就会贴壁,我们一般是24h,全部贴壁。但细胞不会增殖,撤掉PMA,细胞会恢复悬浮。
***********************************

上海的细胞来自ATCC,好像不是很好。我们是从德国买来的,活性不错。
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49888[使用道具]
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对et2005,你买到THP-1细胞了吗?你是哪里的?
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对了,看说明,培养THP-1时要加2-巯基乙醇,不知各位加了没?我的没加,貌似长的还可以,请各位赐教
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qqq111[使用道具]
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请问THP1细胞没有刺激就已经贴壁了,它还是THP1细胞吗?
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ALALA[使用道具]
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没刺激一般不会贴壁的,考虑培养过程中的问题!
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zhezhe[使用道具]
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2-巯基乙醇在细胞培养中有什么作用?
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