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标题:[求助]有没有人养脐带间充质干细胞

zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]有没有人养脐带间充质干细胞



有哪个高手养过脐带间充质干细胞 我想知道从脐带里面怎么提取出干细胞。很多人说用胶原酶2 和胰酶各消化30分钟。不知道具体的操作过程 ？有哪个高手指导一下啊
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-2-22 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先搜索学习一下吧：
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发表于 2012-2-22 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上面的兄弟，你现在养出干细胞没有 我也是提脐带干细胞，
老是死掉。
能不能交流下
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-2-22 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

脐带MSC用DMEM/F-12 +10%FBS培养基。
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-2-22 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

将脐带纵向剪开，取内层细胞，剪碎，用4型胶原酶与胰酶按照1:1混合消化1~2h，用生理盐水稀释3~5倍后，过100um细胞筛网，离心后即可用培养基接种。我用的培养基为KNOCK OUTDMEM+10%FBS。养了很多批次，每一次都长得很好。脐带间充质干细胞一般养不能超过8代。有不足之处，请战友更正。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-2-22 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上的兄弟 不知道你离心的速度是多少 几分钟 我觉得分离出来之后特别粘稠
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-2-22 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

就是因为非常粘稠，所以需要稀释3到5倍，才能过细胞筛网。我的离心速度为1600rpm， 10min。
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04906[使用道具]
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发表于 2012-2-22 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢上面的兄弟，分享你的经验。想问下你胶原酶的浓度和胰酶的浓度是多少？
是不是胶原酶是0.1%，胰酶是0.25%，还有你胶原酶和胰酶比1：1是不是配好后胶原酶和胰酶，还是胶原酶和胰酶按1：1配成消化酶。
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-2-22 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

由于脐带为实质组织，需要通过机械加酶解方法分离出细胞，或者用组织块贴壁法进行细胞分离。酶解方法为常用方法，将脐带组织用机械分离方法分解成小块，然后经胶原酶消化，过滤后离心收集细胞，接种到培养瓶中进行培养。当细胞达到80%以上融合率时，消化细胞，传代，继续培养，如此反复进行。当细胞达到一定量时，收集细胞..
具体还有问题，在查文献。或在联系。
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101010[使用道具]
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发表于 2012-2-22 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问战友怎样促进脐带干细胞贴壁啊 我养的怎么老是不贴啊
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