细胞世界

谢谢LZ的经验分享！请教一下，我现在在养luc-hepa1-6(一种小鼠的肝癌细胞系)前段时间养的挺好，最近越养越差，不知lz有没有养过这种细胞，有什么要注意的，谢谢！
现在实验什么都准备好了，就是没有细胞，急啊！我消化时用的是0.25%的胰酶约1-2min，10%的DMEM

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“请教”不敢当，一起交流。您这种细胞我没养过，但细胞株一般都还是比较好养的。既然前段时间养得挺好，又没有污染，只是状态越来越差，我建议先将血清加到15%（甚至20%），过段时间细胞长皮实了，再换回10%。同时注意下培养液的pH，而且再急也不要天天去看它，可以隔天看一眼，视具体情况处理就行。细胞拿出培养箱时不要忘了把盖拧紧，放回去时也不要忘了把盖拧松。不要着急，准备工作本来就很费时费力，同时又很重要，真正上实验也就那么一会儿，从复苏细胞到真正做实验花一两个月时间很正常，如果是原代培养更费时间。
祝好运！

感谢楼主分享，我也来说两句：
1、细胞是有灵性的，养细胞的过程绝对是对耐心和爱心的锻炼。一种细胞养的时间长了，你会熟悉它的生长规律，比如按多少比例接种几天长至百分之多少，一瓶细胞长至多少时大概有多少个及某种细胞喜偏点儿酸还是偏点儿碱等等。而它会熟悉你的操作手法，比如消化后吹打的力度等等。总之，要想实验有好的结果，一定要人等细胞而不可细胞等人。状态再好的细胞，不经心的培养（长过没有及时传代或者消化不足吹打剧烈或消化过头等等）也得玩儿完；
2、任何细胞在短期不用而需常规传代时，最好是两瓶步调不一致的细胞同时养着，以防污染或操作有误，又得重新复苏甚至绝种；
3、如果一瓶细胞是由极少数细胞甚至单个细胞生长起来的，会形成一个或者几个细胞克隆，待克隆长至足够大时（这个因细胞而异）就应该消化下来重新接种，否则会因局部过密，细胞越长越小，状态也会不好；
4、谈到细胞消化，我个人喜欢在显微镜下看着（多看几个视野），待细胞间隙即将打开，细胞有变圆趋势时就迅速拿进超净台，吸出胰酶，用培养基终止消化，消化适度是吸管一吹，细胞呈“流沙状”下来，而不是整片细胞全部脱落。当然，这个过程，这个“流沙状”还得根据不同细胞来摸索具体时间。而且这个时间也是不定的，与细胞代次（老化程度）、上次消化程度等都有关；
5、在均匀铺板方面，6孔板以上呈十字交叉型晃动（动作轻柔、力度一致）。24孔板先加入一定体积培养基，再将高浓度细胞悬液打入孔内，不要太慢。96孔板用排枪将细胞悬液贴壁轻轻慢慢打入就挺匀了。（个人经验，仅供参考）

先想起这么多。多多交流！

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你说得挺好，“一定要人等细胞而不可细胞等人”和几瓶细胞“步调不要一致”这几点我也深有体会。请问您说的“6孔板以上呈十字交叉型晃动”是指晃动盛细胞悬液的容器吗？我都是在铺板时边用左手拿移液管轻轻吹打，右手种板，铺出来还算均匀，力度掌握好了对细胞状态也影响不大。“24孔板先加入一定体积培养基，再将高浓度细胞悬液打入孔内”这个方法还是第一次听说，下次我也来试试。