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标题:[求助]这个SKOV3怎么了?感觉在一层细沙上生长

viviwang1987[使用道具]
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[求助]这个SKOV3怎么了?感觉在一层细沙上生长



这个细胞之前是师兄在养的,感觉是生长的很快, 但是他6月冻存之后,我9月从低温冰箱,液氮罐中都有复苏,但是发现复苏之后的细胞贴壁的很少,于是我只好把几瓶的放在一起,离心之后重新加入培养液,才勉强好一点,但是接下来就是噩梦啊……

生长很缓慢,以前是3--4天就可以传代的,可是现在就连1一个月都可能不能消化。 好不容易终于可以传代了,发现细胞半天都消化不下来,甚至都放到培养箱内10分钟,20分钟了,还是消化不下来,那些能消化下来的那些,冻存起来后,在复苏,也几乎不贴壁。

细胞背景内的黑点越来越多,感觉好像是细沙一样,使用PBS洗,消化,离心之后,换了新的培养瓶养,能好转一点,但是过不留了几天,情况还是样子,而且悦来越糟糕,细胞慢慢开始变得很奇形怪状,然后就开始裂解。 然后就死了……

细胞的说明书上写着是要McCoy's 5a 来培养的,但是师兄是使用的1640+10%新生牛血清+双抗(青霉素+链霉素---终浓度100u/ml)来培养,他们说那时候也挺好的,可是不知道现在是怎么了,复苏之后变这样半死不活了。

打电话问细胞公司,他们说培养液有影响,可是也有别的师兄说没有影响,所以到底是怎么会是呢??

有哪位也遇到过这样的情况吗?
使细胞老了?
培养液的关系???
还是污染了????

着急 啊!!!!请各位帮帮忙!


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viviwang1987[使用道具]
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有没有谁养过这个细胞的? 能不能传一下照片啊,我找不到这个细胞的照片,包括在ATCC 上。这样我好对比一下啊!!谢谢


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细胞的形状也奇奇怪怪


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我已经不知道怎样才是正常的样子了


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这个应该是已经裂解了吧


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整个背景都是沙沙的,很脏的,但是培养液却没有看到什么浑浊,基本上算是干净的,只是偏黄


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这个也刚从细沙状的那个细胞里消化下来的细胞,一两天之后也开始了裂解……


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viviwang1987[使用道具]
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没有人遇到过这样的问题吗? 到底是怎么了? 是细胞的问题? 污染? 还是血清的问题啊??

请各位高手支招啊!谢谢了
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831226[使用道具]
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可能是支原体污染;细胞交叉污染;血清质量不好。

需要检测。我们这里的SKOV3状态很好。背景很清晰,没有一个小黑点。
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pencil菲[使用道具]
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我前一阵遭遇了一场污染,估计是培养液的问题,当时细胞本来很正常,后来发现镜下看到培养液中有一层细沙样的沉淀,移动培养瓶时可以看到像水中的沙子一样飘动,稍微晃一下有肉眼可见的白色细沙洋沉淀在瓶底,用PBS洗了两次可以了,可是次日又出现了,大概是第3天吧,高倍镜下可以观察到细胞核碎裂脱出(头1、2天看不出细胞的变化),后来就彻底不行了,而且可怕的是会影响到培养箱里的其他细胞的,你仔细观察一下,特别是细胞核,如果和我的情况很像,那就是污染了,赶紧把细胞扔了,绝对不要舍不得,原则上同一培养箱里所有细胞都要放弃,彻底灭菌的。我第一次就彻底灭菌了一次,后来误用了原来的培养液又有2瓶出现,第一时间扔了,还好目前其他细胞没有发现污染。一般这种污染培养液出问题的可能性稍大一点。当然,我还是希望你的细胞不要和我的悲惨经历一样,呵呵
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