[求助]细胞侵袭实验到底怎么做？

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]细胞侵袭实验到底怎么做？

36 1/4 1 2 3 4 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]细胞侵袭实验到底怎么做？

白白的[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74061
精华 0
积分 277
帖子 274
信誉分 100
可用分 2136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态离线

发表于 2012-2-23 13:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我想知道如果想做细胞侵袭实验，
１需要用什么型号的ｔｒａｎｓｗｅｌｌ？
２包被用什么是FN还是胶原，还是其它的什么东西？
３加入的细胞数是多少？
４实验的时间和条件是什么？
５结果怎么统计？
希望有战友可以系统的回答一下，谢谢了。

乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态离线

发表于 2012-2-23 13:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1:ｔｒａｎｓｗｅｌｌ分厂家,一般用COSTAR的,就那一种型号.大约375一块,24孔,但只有12个有小室.
2:侵袭实验最好用MAGEL胶,你搜一下就可以找到.大约1000元
3:细胞数根据细胞的不同差别很大,我一般是10的5次方数量级
4:试验的时间跟条件与细胞和你的药物作用时间有关
5:随机选取5个视野计数就可以了!

白白的[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74061
精华 0
积分 277
帖子 274
信誉分 100
可用分 2136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态离线

发表于 2012-2-23 13:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #2 乌贼老弟的帖子

先谢谢楼上，还有一些细节问题
１　你指的ＭＡＧＥＬ是不是ＢＤ公司的Matregel，如果用这个包被的话，每空用多少量，具体的方法是什么。
２。实验的时间一般是干预过后加入到Transwell板中后，大概加入Transwell中多长时间可以计数看结果（期间是不是放在培养箱就可以了）？
3.　实验结果是不是就是计数下槽的细胞数就代表穿过的细胞数，也就代表细胞的侵袭能力？

问题比较多，不好意思。

woshituzhu[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75774
精华 1
积分 384
帖子 443
信誉分 102
可用分 3001
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-27
状态离线

发表于 2012-2-23 13:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1 包被基底膜：50mg/L Matrigel 1:8 稀释液包被Transwell小室底部，4℃风干。
2 水化基底膜.....
3 接种细胞 .....
4 常规培养（培养箱）24－48小时（依干预情况和癌细胞侵袭能力而定）
5 固定及染色：取出Transwell 小室，PBS 淋洗，用棉签擦去微孔膜上层的细胞，95％乙醇固定，4g/L 台盼蓝溶液染色。
6 镜检：在倒置显微镜下计数移至微孔膜下层的细胞。每个样本计数5－10个视野。

白白的[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74061
精华 0
积分 277
帖子 274
信誉分 100
可用分 2136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态离线

发表于 2012-2-23 13:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #4 woshituzhu 的帖子

谢谢楼上的详细回答。
1。楼上的意思是先将matrigel以1:8稀释，是不是用DMEM原液或者1640原液稀释？　还有八倍稀释是不是太稀了啊。
２。楼上指的染色是指染色贴壁在底部的迁移细胞吗？如果是悬浮细胞是不是就是把下槽全部吸出来，然后细胞计数就可以了？

woshituzhu[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75774
精华 1
积分 384
帖子 443
信誉分 102
可用分 3001
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-27
状态离线

发表于 2012-2-23 13:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #5 白白的的帖子

1 八倍稀释应该可以，不过具体还是要自己摸索。
2 我没做过悬浮细胞。我想应该是这样的吧。仅供参考。
祝试验顺利！

viviwang1987[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 77490
精华 0
积分 458
帖子 636
信誉分 100
可用分 3953
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2012-2-23 13:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问楼上两个问题

1、包被基底膜：如何进行包被？就是用吸管低在小室上面吗？怎样才能够铺的均匀呢？我看有的文献上说小室上腔面铺Matrigel，下面铺Fn，有这个必要?
2、关于Matrigel的浓度和量各文献上报道的也不一样，到底是多少比较合适？听说小室是一次性使用的，尽量要一次成功啊，我老板很抠门的！所以请大家多提宝贵意见

viviwang1987[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 77490
精华 0
积分 458
帖子 636
信誉分 100
可用分 3953
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2012-2-23 13:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

另外，选用哪种细胞做侵袭实验比较好啊？

白白的[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74061
精华 0
积分 277
帖子 274
信誉分 100
可用分 2136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态离线

发表于 2012-2-23 13:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是啊，好像没有必要两面都包被吧，有没有人回答一下啊，我主要做内皮细胞的迁移实验，谢谢。
　　还有如果是8倍稀释的话应该很容易铺平的，但是如果太稀，包被的液体不是也会流到下槽去吗？

ffooll[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73418
精华 0
积分 437
帖子 574
信誉分 100
可用分 3666
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态离线