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标题:[求助]关于流式细胞术检测小鼠T细胞亚群抗体问题

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发表于 2012-2-24 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于流式细胞术检测小鼠T细胞亚群抗体问题



小弟想用流式细胞分析术来了解免疫后小鼠脾细胞的CD4，CD8的量还有它们的比值。
查文献要用FITC-抗CD4单抗 PE-抗CD8单抗，它们两个是荧光的
我们实验室简单，还有课题经费也不是很多，想请教下作流式T细胞计数一定要用荧光的吗？
有没有普通的，实验效果还可以的，或者是荧光的比较物美价廉的
小弟刚开始做实验，可能这个问题比较肤浅，望大虾们指教。
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发表于 2012-2-24 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

需要用流式抗体（荧光偶联抗体）标记后流式检测。
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发表于 2012-2-24 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 2541 的帖子

谢谢，荧光抗体很贵呀！看来又要换一种指标咯。
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发表于 2012-2-24 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

荧光的单抗CD4 CD8要多少价位呀？
我是做实验小菜鸟，查的一个100微升都要3000多，不知道有没有便宜的，然后效果又是不错的。
望指导。
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发表于 2012-2-24 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

荧光抗体就这个价。
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发表于 2012-2-24 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
FITC-抗CD4单抗 PE-抗CD8单抗,是不是CD4和CD8，一个是FITC，一个是PE的就可以了
不需要说一定要选择哪个，只要它们的荧光能区别开来就可以了，是不是
望大虾指教。
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发表于 2012-2-24 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
ITC-抗CD4单抗 PE-抗CD8单抗,是不是CD4和CD8，一个是FITC，一个是PE的就可以了
不需要说一定要选择哪个，只要它们的荧光能区别开来就可以了，是不是
望大虾指教。

————————————————————————————————————————————————————————————————

PE：Phycoerythrin 藻红蛋白；488nm，575nm（橙红）
FTTC，异硫氰酸荧光素 488nm，525nm（绿）
APC：allophycocyanin，别藻青蛋白，最大吸收峰：650nm，最大发射荧光峰：660nm，适用于双激光流式仪，可被600-640nm波长的激光激发。
PerCP ：peridinin chlorophyll protein，多甲藻叶绿素蛋白，最大激发波峰490nm，被488nm的氩离子激光激发后，发射光峰值约为677nm，与FITC、PE进行多色荧光染色补偿重叠较少，非特异性结合也较少。虽然较易使用，但量子产量不高，多用于检测表达较高的抗原。

以上染料都可以任意组合标记抗体.LZ的说法是对的（不需要说一定要选择哪个，只要它们的荧光能区别开来就可以了）
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发表于 2012-2-24 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢！学习咯!
小弟想用流式细胞术测量基因疫苗免疫小鼠后脾细胞CD8、CD4的变化，用的是Anti-Mouse CD4 FITC和Anti-Mouse CD8a PE测量CD4和CD8的百分比以及它们的比值。不知道行不行。对这个Anti-Mouse CD8a PE中的CD8a有点疑惑。上述2个试剂能测出小弟想要的目的吗？万分感谢，刚学实验，有很多要进修的。
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发表于 2012-2-24 12:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！学习咯!
小弟想用流式细胞术测量基因疫苗免疫小鼠后脾细胞CD8、CD4的变化，用的是Anti-Mouse CD4 FITC和Anti-Mouse CD8a PE测量CD4和CD8的百分比以及它们的比值。不知道行不行。对这个Anti-Mouse CD8a PE中的CD8a有点疑惑。上述2个试剂能测出小弟想要的目的吗？万分感谢，刚学实验，有很多要进修的。

————————————————————————————————————————————————————————————————

免疫学书上有明确指示哦！！！CD8是复合受体，主要表达在CTL细胞表面，识别APC表面的MHC-I类分子，有功能的CD8复合受体主要由两种组合：alpha/alpha链组合和alpha/beta链组合，所以我们用CD8a荧光标记啊，a就是alpha链的简写吧。
这两种试剂可以测出你需要的结果哦！祝好！
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TAT[使用道具]
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发表于 2012-2-24 12:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 S6044 于 2012-2-24 12:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
谢谢！学习咯!
小弟想用流式细胞术测量基因疫苗免疫小鼠后脾细胞CD8、CD4的变化，用的是Anti-Mouse CD4 FITC和Anti-Mouse CD8a PE测量CD4和CD8的百分比以及它们的比值。不知道行不行。对这个Anti-Mouse CD8a PE中的CD8a ...

恩 谢谢！长知识了。已经买了抗体！
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