[求助]单核巨噬细胞培养的相关问题

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标题:[求助]单核巨噬细胞培养的相关问题

vcve[使用道具]
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发表于 2012-3-5 14:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是新手，准备提人外周血单核细胞，使之转化为巨噬细胞。想请教几个问题？
1 提取单核细胞后，是培养几天它自己就变成巨噬细胞了吗？还是要加什么刺激？
2 培养基，我要用1640，一袋1640+青链+碳酸氢钠，调完PH值，过滤分装，还用往里面加HEPES和谷氨酰胺吗？我看有人培培养基就往里加
3 准备用6孔板，每孔的密度应该多少?每孔种10的7次方个可以吗？

jujuba[使用道具]
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发表于 2012-3-5 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.本人没培养过单核巨噬细胞.
2.参考培养基说明书.据我所知,GIBCO的不用加.
3.每孔能种多少个细胞,得做预实验才能确定.因为不同的细胞其所占面积不同.

ha111[使用道具]
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发表于 2012-3-5 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我买的是THP-1，需要加PMA诱变为巨噬细胞。你打算用淋巴细胞分离液提单核细胞吗？好像不是方便提取。

hold住[使用道具]
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发表于 2012-3-5 16:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个试验我已经做了很久了，加G-CSF可诱变为巨噬细胞，其为贴壁的。但是养的时间不长，10左右就死光了，郁闷中。发张图片

附件

2012-3-5 16:46

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wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-3-5 16:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个试验我已经做了很久了，加G-CSF可诱变为巨噬细胞，其为贴壁的。但是养的时间不长，10左右就死光了，郁闷中。发张图片

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我也在做诱导外周血单核细胞转化为巨噬细胞的实验，请问是不是必须加G-CSF才能使之分化为巨噬细胞？G-CSF作用的浓度和时间是分别多少啊？不胜感谢！

hold住[使用道具]
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发表于 2012-3-5 16:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼上的，不好意思我写错了，是用GM-CSF刺激的。这个用L929细胞上清来制备。

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-3-5 16:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也在做相关实验，文献上很多都是用L929细胞上清作为CSF 来源。当我还没开始做，有进展的战友多指教啊，谢谢！

vcve[使用道具]
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