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标题:[求助]巨噬细胞的transwell效果图

qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-3-5 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]巨噬细胞的transwell效果图



做了一阵巨噬细胞迁移试验，对迁移结果还存在一些迷惑，现放上一张效果图：
1。发现其中染色的颜色有深浅，不知道这其中有什么区别，计数的时候是否是同样计数；
2。因无法辨认核，导致细胞计数也存在一定困难，是否有解决办法。


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qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-3-5 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是另外一次实验的结果图之一
这其中那些很深的染色好像是膜上微孔，是否算迁移一半的细胞呢？又该如何处理？
谢谢各位！


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toy[使用道具]
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发表于 2012-3-5 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

黑色的是膜上的孔。
细胞是比较大的蓝色的片状dd
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发表于 2012-3-5 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢。
但如果这样，怎么样才能准确的计数呢，因为感觉细胞边界不清稀，容易判断不出具体数目。
而看前人总结里说可以用醋酸脱色测吸光度，但如果考虑到染色边界会出现颜料蓄积，而且很难擦除，怎么排除这些干扰呢。
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发表于 2012-3-5 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
黑色的是膜上的孔。可能染色时间过长的缘故 醋酸脱色测吸光度只适合于结晶紫染色 HE染色能分清细胞核 方便计数
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发表于 2012-3-5 18:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

随机找5个视野，计数
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-3-5 18:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再打扰下，我这个就是结晶紫染色结果，边界处燃料沉积较多，如果洗脱，怀疑会干扰结果，该怎么处理呢。因为如果只计数的话，中心和边界处趋势感觉不一样。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-3-5 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问你养的细胞是腹腔巨噬细胞还是骨髓的巨噬细胞啊？我在做骨髓的巨噬细胞，想请教一下养细胞的经验!!谢谢
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发表于 2012-3-5 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般把分离出来的骨髓细胞，去一下红，然后在DMEM里，加上20%的L929细胞培养上清培养。三天后取上面漂着的仍未贴壁的细胞，再培养三天，这部分细胞会逐渐贴壁，分化为有成熟的巨噬细胞，用cd11b做流式检测，阳性率可以达到97%（我做的比例）。然后就可以用了。这些原代的分化出来的巨噬细胞不好消化，建议用细胞刮，可存活相当长的时间，如一周以上。
L929上清中含浓度较高的CSF，可以诱导骨髓细胞分化为巨噬细胞。直接去L929培养上清（18h以上）即可。
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-5 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是从人大网膜乳斑取下来的细胞，请大家帮我分析下都是些什么细胞，以及哪些是我要的巨噬细胞


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